孔令慧，周炜，王光强，夏永军，张汇，李红梅，艾连中，熊智强*

1(上海理工大学 医疗器械与食品学院，上海食品微生物工程研究中心，上海，200093)2(扬州市扬大康源乳业有限公司，江苏 扬州,225004)

干酪乳杆菌胞外多糖基因簇的调控基因在大肠杆菌中异源表达

孔令慧1，周炜2，王光强1，夏永军1，张汇1，李红梅1，艾连中1，熊智强1*

1(上海理工大学 医疗器械与食品学院，上海食品微生物工程研究中心，上海，200093)2(扬州市扬大康源乳业有限公司，江苏 扬州,225004)

为研究干酪乳杆菌胞外多糖的生物合成和转录调控，对其生物合成基因簇中假定的转录调控因子LC2W_2170进行克隆，并在大肠杆菌(Escherichiacoli)中异源表达。首先，利用PCR技术从干酪乳杆菌LC2W中扩增出目的基因LC2W_2170，将其插入到大肠杆菌表达载体pET24a和pET30a中，构建出LC2W_2170 N端或C端和N端均含有His蛋白标签的重组质粒。含上述质粒的E.coli经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析并未发现LC2W_2170蛋白可溶性表达。对LC2W_2170氨基酸序列利用Phobius服务器分析，发现该蛋白N端存在跨膜区(前27个氨基酸为跨膜序列)。切除此跨膜区域重新构建重组表达质粒后，在E.coli中成功实现LC2W_2170蛋白可溶性表达。研究为进一步纯化该转录调控因子，并研究其功能和对胞外多糖生物合成基因簇的转录调控机制奠定了基础。

干酪乳杆菌；胞外多糖；转录调控因子；异源表达；大肠杆菌

乳酸菌是一类能利用碳水化合物并产生大量乳酸的细菌总称，属于革兰氏阳性菌，不产芽孢，在自然界中分布广泛，从各种植物的表面、人畜禽类的肠道和腌制食品等环境中都能检测到它的存在，在食品和医药领域应用较多的乳酸菌主要有乳杆菌属和乳酸乳球菌属等。……