谷海涛，李松，陈阿娜

1(安徽工程大学 生物与化学工程学院，安徽 芜湖，241000)2(江苏诺泰生物制药股份有限公司，江苏 连云港，222000)

嵌合突变嗜酸普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶结构域B对酶学性质及功能的影响

谷海涛2，李松1*，陈阿娜1*

1(安徽工程大学 生物与化学工程学院，安徽 芜湖，241000)2(江苏诺泰生物制药股份有限公司，江苏 连云港，222000)

为考察嗜酸普鲁兰芽孢杆菌(Bacillusacidopullulyticus)普鲁兰酶结构域B对热稳定性及其他酶学特性和功能的影响，采用嵌合蛋白技术将B.acidopullulyticus普鲁兰酶的结构域B置换为Geobacillusthermoleovorans普鲁兰酶结构域B。嵌合突变体在60 ℃下的半衰期由34.9 min提高至168.4 min，解折叠一半时的温度由65 ℃提高至72 ℃，嵌合突变体较野生型具有更加优良的动力学稳定性和热动力学稳定性。结构域B置换后，最适pH碱向偏移至pH6.5，最适温度提高至70 ℃。比酶活及底物特异性实验结果显示，嵌合突变削弱了酶分子与普鲁兰多糖的结合，转而有利于与糊精及可溶性淀粉的结合。淀粉糖化结果显示，嵌合突变不影响突变体的实际应用性能。上述结果表明，B.acidopullulyticus普鲁兰酶结构域B对酶蛋白酶学性质影响显著，可通过同源置换构建适合于不同淀粉糖化工艺的突变体。

嵌合蛋白；普鲁兰酶；结构域B；酶学特性；淀粉糖化

普鲁兰酶是一种双向催化酶，能够催化普鲁兰多糖、淀粉等多聚葡萄糖类底物分支部位的α-1,6-糖苷键的水解[1-3]，特定条件下也能催化α-1,6-糖苷键的反向合成[4-7]，因而可应用于糖苷化合物分子结构解析、淀粉原料糖化以及功能糖化合物合成等诸多领域[8]。……