刘秋雨+裴日周+钱林林+连增林

摘要：目的 观察六氧化四砷（As4O6）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响，探讨其作用机制。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞，不同浓度As4O6对细胞进行干预。MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，划痕愈合实验检测细胞迁移能力，半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白E1（Cyclin E1）、细胞周期蛋白A2（Cyclin A2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、p21和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA表达情况。结果 As4O6对MCF-7细胞增殖有明显抑制作用，且呈剂量依赖性（P<0.01）；与对照组（0 μmol/L）比较，As4O6浓度为9、12、15 μmol/L时，MCF-7细胞凋亡率明显增加（P<0.05，P<0.01）；As4O6高（3 μmol/L）、低（1 μmol/L）浓度均可有效抑制MCF-7细胞的迁移能力（P<0.01）；随As4O6浓度增加，Cyclin E1、Caspase-3、p21 mRNA表达明显升高，Cyclin A2、MMP-9 mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 As4O6对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、侵袭及迁移能力有明显抑制作用，其机制可能与增强Cyclin E1、Caspase-3、p21及抑制Cyclin A2、MMP-9 mRNA表达有关。

关键词：六氧化四砷；乳腺癌细胞；细胞凋亡；细胞增殖；侵袭；迁移；细胞周期

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.06.011

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）06-0044-05

Abstract： Objective To observe the effects of tetra-atsenic oxide （As4O6） on the proliferation， migration and invasion of human breast cancer MCF-7 cells； To explore its potential mechanism. Methods The human breast cancer MCF-7 cells were regarded as the research object and cultured in vitro， with different concentrations of As4O6 using to intervene in MCF-7 cells. The cell proliferation was detected by MTT assay； the flow cytometry and wound-healing assay were used to detect the cell apoptosis and migration， respectively. The expressions of Cyclin E1， Cyclin A2， Caspase 3， p21 and MMP-9 mRNA were accessed by semi quantitative RT-PCR. Results As4O6 had a significant inhibitory effect on the proliferation of MCF-7 cells in a dose dependent manner. Compared with the control group （0 μmol/L）， the apoptosis rate increased significantly when the concentration of As4O6 was 9， 12， 15 μmol/L （P<0.01）. Either As4O6 at high （3 μmol/L） or low （1 μmol/L） concentration could effectively inhibit the migration of MCF-7 cells （P<0.01）. With the increasing concentration of As4O6， the expressions of Cyclin E1， Caspase 3， and p21 mRNA significantly increased， while the expressions of Cyclin A2 and MMP-9 mRNA significantly decreased （P<0.05， P<0.01）. Conclusion As4O6 can significantly inhibit the proliferation， cycle， invasion and migration of breast cancer MCF-7 cells， and the mechanism may be related to the increase of expressions of cyclin E1， caspase 3， p21 and inhibition of expressions of cyclin A2 and MMP-9.

Key words： tetra-arsenic oxide； breast cancer cells； cell apoptosis； cell proliferation； invasion； migration； cell cycle

砷劑是古老的抗肿瘤药物，以常见的氧化剂和硫化剂等形式存在。《本草纲目》载：“砒石又名信石、砒霜，可治烂肉、蚀瘀及腐瘰。”虽然砷剂被沿用至今，但其毒性限制了其适用范围。三氧化二砷（As2O3）是最广为熟知的砷剂，临床用于急性早幼粒细胞白血病及多种肿瘤的治疗。六氧化四砷（As4O6）对子宫颈癌细胞[1]、人胃癌细胞[2]、上皮癌细胞[3]等均有一定抑制作用，但其对乳腺癌的干预研究鲜有报道。因此，本研究观察不同浓度As4O6对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、周期和侵袭、迁移能力的影响，为As4O6干预乳腺癌的分子作用机制提供依据。endprint

1 实验材料

1.1 细胞

人乳腺癌MCF-7细胞株，中国科学院上海细胞库。

1.2 药物及制备

As4O6，纯度99.99%，韩国Chonjisan Co.， Ltd.公司。称取一定量As4O6溶解于水中，配制成5 mmol/L母液，过滤，室温保存备用，临用时以培养基稀释至不同浓度。

1.3 主要试剂与仪器

胎牛血清（FBS）、0.25%胰蛋白酶、MEM培养液，Hyclone公司。……