贺兰芝孟雅坤　韩延忠　张振芳　尹萍　桑秀秀　肖小河　柏兆方

[摘要] 探讨木犀草素（luteolin，Lut）对对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）诱导的L02肝细胞损伤的保护作用。CCK8法检测Lut对L02细胞活性的影响；筛选APAP诱导L02细胞损伤的浓度及作用时间；细胞形态学、CCK8实验和流式细胞术检测分析Lut对APAP诱导的L02细胞凋亡的影响；比色法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽（GSH）及超氧化物歧化酶（SOD）活性；RTPCR检测凋亡相关基因Bax，Bcl2，caspase3的表达。结果显示Lut在2.5～40 μmol·L-1不影响L02细胞活性；12 mmol·L-1 APAP作用于L02细胞12 h可用于建立肝细胞损伤模型。与模型组相比，Lut组细胞状态明显改善，胞体增大，贴壁能力恢复明显；细胞凋亡率明显下降；MDA含量显著下降（P<0.05或P<0.01），GSH和SOD活性显著提高（P<0.05或P<0.01），同时能够上调Bcl2及下调Bax，caspase3 mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。该实验证明了Lut对APAP诱导的L02细胞损伤有保护作用，其机制可能与其减轻氧化应激反应和抑制细胞凋亡有关。

[关键词] 木犀草素； 对乙酰氨基酚； L02细胞； 氧化应激； 细胞凋亡

Protective effects of luteolin against acetaminopheninduced

damage in L02 liver cells

HE Lanzhi1，3， MENG Yakun2，3， HAN Yanzhong3， ZHANG Zhenfang3，

YIN Ping2，3， SANG Xiuxiu3， XIAO Xiaohe3*， BAI Zhaofang3*

（1. School of Pharmacy， Hunan University of Traditional Chinese Medicine， Changsha 410208， China；

2. School of Pharmacy， Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China；

3. China Military Institute of Chinese Medicine， 302 Military Hospital， Beijing 100039， China）

[Abstract] This paper was aimed to investigate the protective effects of luteolin （Lut） against acetaminophen（APAP）induced damage in L02 liver cells. CCK8 was used to detect the cell activation of L02 cells treated by different Lut. The concentration and time of APAP induced L02 cell damage was screened. The effect of Lut on APAP induced apoptosis of L02 cells was detected by cell morphological observation， CCK8 assay and flow cytometry. The contents of MDA， GSH and SOD activity in cell supernatant were detected by colorimetric assay. The expression of apoptosisrelated genes Bax， Bcl2 and caspase3 was detected by RTPCR. The results showed that Lut in 2.540 μmol·L-1 range does not affect the activity of L02 cells； 12 mmol·L-1 APAP incubated with L02 cell 12 h to establish damage model. Compared with the model group， the cell status of Lut group was significantly improved， the cell body was increased， the adherence ability was recovered， and the apoptosis rate was obviously decreased. MDA content decreased significantly （P<0.05， P<0.01）， GSH and SOD activity significantly increased （P<0.05， P<0.01）， at the same time， it could upregulate expression of Bcl2 mRNA and downregulate the expression of Bax and caspase3 mRNA. In conclusion，Lut has protective effect on APAP induced L02 cell injury， and its mechanism may be related to the reduction of oxidative stress and inhibition of apoptosis.

[Key words] luteolin； acetaminophen； L02 cells； oxydatve stress； apoptosis

doi：10.4268/cjcmm20162224

对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）是一种常见的解热镇痛药，APAP在治疗剂量下安全，但过量使用会造成急性肝损伤[1]。APAP过量服用在许多国家已成为故意或意外死亡的原因之一[23]。目前，有证据证实细胞内氧化应激是APAP引起急性肝损伤的重要生物学机制之一[47]，因此，探讨能够有效预防或缓解APAP引起的急性肝损伤途径具有积极的临床意义。

木犀草素（luteolin，Lut）属于黄酮类化合物，主要存在于菊花、忍冬花、金银花、紫苏叶等植物中，近年研究表明木犀草素具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节等多种作用[811]。本文通过预防性给药，研究给药后氧化应激损伤相关生理指标变化，探讨Lut的细胞保护和抗凋亡作用，为对乙酰氨基酚肝损伤的防治提供进一步的实验依据。

1 材料

1.1 细胞 正常人肝细胞株（L02）为本实验室保存。……