郭志琴，吕青山，王振，陆丽慧，张琳，邬万新

（嘉兴市第一医院，浙江 嘉兴 314000）

Jab1蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

郭志琴，吕青山，王振，陆丽慧，张琳，邬万新

（嘉兴市第一医院，浙江 嘉兴 314000）

目的研究c-Jun激活区结合蛋白1（Jab1）在乳腺癌组织中的表达，探讨其在乳腺癌发生发展中的作用以及与p27kip1的相关性。方法回顾性收集111例乳腺癌及癌旁组织标本，采用免疫组织化学EnVision二步法检测乳腺癌及相应癌旁组织中Jab1蛋白的表达，并分析其与临床病理特征的关系。结果本组乳腺癌组织中Jab1蛋白阳性表达率为92.8%（103/111），而癌旁组织中Jabl蛋白阳性表达率为10.8%（12/111），两者差异有统计学意义（P＜0.05）；Jab1蛋白表达与乳腺癌患者发病年龄、组织学类型、激素受体状态等无关（均P＞0.05），而与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期有关（均P＜0.01）；Jab1蛋白阳性表达与p27kip1表达呈显著负相关（r=-0.528，P＜0.01）。结论Jab1蛋白的异常表达可能参与了乳腺癌的发生发展，检测Jab1蛋白有助于乳腺癌的临床诊断。

乳腺癌；c-Jun激活区结合蛋白1；p27kip1；病理

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率不断上升，已位居女性恶性肿瘤死亡率的首位，严重危害女性身心健康[1]。p27kip1是重要的细胞周期负性调控因子，其蛋白表达和亚细胞定位改变与乳腺癌的发生发展和预后密切相关[2-3]。Jab1可以特异性地与p27kip1结合，实现p27kip1出核转运，并使其通过泛素-蛋白酶体途径降解。然而，目前国内未见Jab1蛋白在乳腺癌组织中的表达研究。本研究分析Jab1蛋白与乳腺癌临床病理特征和p27kip1的关系，探讨其在乳腺癌发生发展中可能发挥的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2004年1月～2005年12月临床及病理资料完整、行手术治疗并经病理检查证实为原发性乳腺癌的组织标本111例。均为女性，年龄31～82岁，平均（51.3±10.1）岁。肿瘤大小0.5～10.0cm，平均（2.7±1.8）cm。发生淋巴结转移51例（45.95%）。根据美国癌症联合会（AJCC）乳腺癌TNM分期标准：I期31例，Ⅱ期58例，III期22例。所有患者术前均未接受放化疗或其他辅助治疗。本研究经嘉兴市第一医院医学伦理委员会同意批准，并获得患者或其家属的知情同意。

1.2 方法 主要试剂：小鼠抗人Jab1单克隆抗体（611618，美国BD公司）；兔抗人p27kip1多克隆抗体 （C-19，美国Santa Cruz公司）；ER抗体（SP1）、PR抗体（SP2）和c-erbB-2抗体（SP3）（美国Zymed公司）；免疫组织化学检测试剂盒 （k5007，丹麦Dako公司）。按试剂盒说明，采用EnVision二步法，PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定：ER和PR以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性；c-erbB-2以细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性；Jab1和p27kip1以细胞核或胞核伴胞质出现棕黄色颗粒为阳性，只有细胞质出现棕黄色颗粒为非特异性染色。每张切片选取5个有代表性的高倍视野 （400×），每个视野计数300个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分率。＜10%为（-），10%～30%为 （+），31%～60%为 （++），＞60%为（+++）。（-）和（+）为低表达，（++）和（+++）为高表达。

1.3 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件，相关性分析采用χ2检验、Fisher精确概率法和Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 Jab1蛋白在乳腺癌组织中的表达 免疫组织化学染色结果显示，Jab1蛋白主要定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状，胞质偶有少量表达。癌旁组织中Jab1蛋白表达不明显或不表达（图1A），而乳腺癌组织中表达较高（图1B）。本组乳腺癌组织中Jab1蛋白阳性表达率为92.8%（103/111），高表达率为58.6%（65/ 111），低表达率为41.4%（46/111），而癌旁组织中Jab1蛋白阳性表达率仅为10.8%（12/111），两组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。本研究也检测了p27kip1蛋白的表达及分布，发现其阳性染色信号在细胞核或细胞质呈弥漫分布的棕黄色或棕褐色颗粒 （图1C）。本组乳腺癌组织中p27kip1蛋白阳性表达率为45.0%（50/111），高表达者仅18.9%（21/111）。

图1 乳腺癌组织中Jab1和p27kip1免疫组织化学染色。（1A：Jab1蛋白在癌旁组织内低表达或不表达；1B：Jab1蛋白在癌组织内高表达；1C：p27kip1蛋白在癌细胞核和细胞质弥漫分布）（EnVision法×100）

2.2 Jab1蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系Jab1蛋白在乳腺癌组织中的表达与患者发病年龄、组织学类型、激素受体状态等均无关（均P＞0.05），而与肿瘤大小、淋巴结转移情况和TNM分期差异有统计学意义（均P＜0.01）。详见表1。

表1 Jab1蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系 （n，%）

续表1

2.3 乳腺癌组织中Jab1和p27kip1蛋白表达的相关性 乳腺癌组织中Jab1蛋白与p27kip1蛋白表达呈显著负相关（r=-0.528，P＜0.01），详见表2。

表2 Jab1蛋白表达与p27kip1表达的关系

3 讨论

研究发现，细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27kip1的失调控与乳腺癌的发生发展密切相关，但具体作用机制尚未完全阐明。p27kip1的表达调控主要位于转录后阶段，包括Jab1介导的出核转运以及随后的泛素化降解。因此，在乳腺癌中研究Jab1蛋白表达以及与p27kip1的相关性具有重要意义。Jab1是COP信号复合物的第5亚单位，也被称为CSN5，能与多种蛋白相互作用，是一种重要的信号转导分子[4]。据文献报道，Jab1可以特异性地与p27kip1结合，将细胞核内磷酸化的p27kip1携带运输到细胞质中，使其通过泛素-蛋白酶体途径降解[5]。已有研究显示，Jab1在鼻咽癌、卵巢癌等[6-7]中呈高表达。Hsu等[8]报道Jab1在乳腺癌中的表达增加与p27kip1的下降及乳腺癌的不良预后有关。

本文研究显示，Jab1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，与上述文献报道相似，提示Jab1高表达可能与乳腺癌的发生有关。本研究结合乳腺癌患者的临床病理资料发现，Jab1蛋白阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期有关，而这些临床病理指标都是与患者预后密切相关的重要因素。进一步分析发现，乳腺癌组织中Jab1蛋白阳性表达与p27kip1蛋白表达呈负相关，提示Jab1和p27kip1共同参与了乳腺癌的发生发展。上述这些结果提示，在乳腺癌组织中，Jab1蛋白表达异常增加时，可以加速p27kip1的出核转运以及继发的泛素化降解，导致癌细胞内p27kip1蛋白水平下降，引发细胞周期调控紊乱，从而参与乳腺癌的发生发展。Jab1蛋白表达上调是乳腺癌的重要恶性表型特征之一，与乳腺癌的恶性进展有关，其高表达提示患者可能预后不良。然而，对于Jab1介导的p27kip1出核降解的具体机制尚未明了，在这条途径中，Jab1究竟如何发挥作用尚有待进一步研究。

综上所述，Jab1蛋白的异常表达可能参与了乳腺癌的发生发展，并与p27kip1负相关。Jab1可能通过与p27kip1结合来调节p27kip1的核内外分布并影响其表达，从而参与调控乳腺癌细胞的生长。检测Jab1蛋白有助于乳腺癌的临床诊断及预后判断，为乳腺癌的基因治疗提供新的可能途径。

[1] Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics. CA Cancer J Clin，2011，61（2）:69

[2] Wander SA，Zhao D，Slingerland JM.p27:a barometer of signaling deregulation and potential predictor of response to targeted therapies.Clin Cancer Res，2011，17（1）:12

[3]Andre F，Conforti R，Moeder CB，et al.Association between the nuclear to cytoplasmic ratio of p27 and the efficacy of adjuvant polychemotherapy in early breast cancer.Ann Oncol，2012，23（8）:2059

[4] Shackleford TJ，Claret FX.JAB1/CSN5:a new player in cell cycle control and cancer.Cell Div，2010，5:26

[5] Wang Y，Yu YN，Song S，et al.JAB1 and phospho-Ser10 p27 expression profile determine human hepatocellular carcinoma prognosis.J Cancer Res Clin Oncol，2014，140（6）:969

[6] Pan Y，Zhang Q，Tian L，et al.Jab1/CSN5 negatively regulates p27 and plays a role in the pathogenesis of nasopharyngeal carcinoma.Cancer Res，2012，72（7）:1890

[7] Lee WS，Park ES，Kim DH，et al.Expression of p53，p27 and Jab1 protein in epithelial ovarian tumors.Eur J Gynaecol Oncol，2012，33（4）:358

[8] Hsu MC，Chang HC，Hung WC.HER-2/neu transcriptionally activates Jab1 expression via the AKT/beta-catenin pathway in breast cancer cells.Endocr Relat Cancer，2007，14（3）:655

浙江省医学重点学科建设项目（GJJX-010-001）；嘉兴市科技计划项目（2013AY21042-3）；嘉兴市医学重点学科建设项目（04-Z-01）