黎春彤，李 翔，周 亮，王心慧，张美芳

HPLC法测定行连续性肾脏替代治疗超滤液中莫西沙星的含量及其应用

黎春彤，李 翔*，周 亮，王心慧，张美芳

目的 建立HPLC法测定行连续性肾脏替代治疗重症医学科患者超滤液中莫西沙星的含量，反映滤器对莫西沙星的清除情况，为其给药剂量调整提供可靠依据。方法 选用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)，设置流速为1.0 mL/min；检测波长为293 nm；柱温25 ℃；进样量10 μL；运行时间6 min。结果 莫西沙星在2.000～60.00 μg/mL范围内与其峰面积线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为98.74%(n=9)，RSD为0.76%。结论 本方法简单、快速，结果准确，重复性好，适用于行连续性肾脏替代治疗超滤液中莫西沙星的含量测定，能够反映滤器对莫西沙星的清除情况。

连续性肾脏替代治疗；超滤液；莫西沙星；HPLC

0 引言

由细菌、病毒、支原体、衣原体等多种病原微生物所致的感染性疾病遍布临床各科，其中细菌性感染最为常见，因此，抗菌药物成为临床应用最广泛的药物之一。莫西沙星为第4代新型氟喹诺酮类广谱抗菌药物，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌及非典型病原体(支原体、衣原体、军团杆菌)均有良好的抗菌活性[1]，具有良好的安全性和耐受性，可作为糖尿病患者、老年患者以及肾损伤患者的选择性药物使用[2]。本课题组前期针对行连续性肾脏替代治疗(Continuous renal replacement therapy，CRRT)患者的药物清除情况改变进行了研究，发现对这部分患者的CRRT超滤液进行目标药物含量测定比对患者血药浓度进行监测更具优势[3]，对患者无创，且样品采集、前处理简单易行，含量测定迅速、结果准确。安全性相对较好的莫西沙星在行CRRT患者中应用较多，因此，本课题组对其在CRRT超滤液中含量测定进行研究，据此反映药物的清除情况，对患者的用药剂量进行调整。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪，四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站(美国安捷伦公司)；AE240型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；pH计(上海梅特勒-托利多公司)，LGJ-10D普通型冷冻干燥机(上海创奕科教设备有限公司)。

莫西沙星标准品(德国拜耳公司，纯度：96.8%，批号：R-1004-01G)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，实验中所用水均为超纯水，连续性肾脏替代治疗超滤液(由本院ICU科室提供)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)；柱温：25 ℃；检测波长：293 nm；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密量取莫西沙星标准品10.00 mg，置50 mL容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得200 μg/mL的溶液，作为莫西沙星的对照品储备液。精密量取莫西沙星对照品储备液5.0 mL，置50 mL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，即得20.00 μg/mL的莫西沙星对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取行CRRT患者超滤液样品1 mL，置离心管中，-20 ℃冷冻，转移至冷冻干燥机中，制得冻干粉。加入200 μL纯化水稀释溶解，混匀，过滤，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取患者使用莫西沙星前的超滤液，按照“2.2.2”项下方法制备成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验 分别取对照品溶液和供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件分析进样，记录色谱图。结果显示，在供试品溶液和对照品溶液色谱图中莫西沙星的保留时间一致，结果见图1。

2.4 线性关系 精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加超纯水至刻度，摇匀，即得不同浓度的对照溶液。按“2.1”项下色谱条件分析，以浓度为横坐标(X)，色谱峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得莫西沙星的回归方程为Y=14.36 X+1.186，r=0.999 9，线性范围为2.000～60.00 μg/mL。

图1 超滤液中莫西沙星的HPLC图谱

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积并计算，RSD为1.57%，表明所建立的方法精密度良好。

2.6 重复性试验 取行CRRT患者超滤液样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件，分别进样。结果莫西沙星的平均含量为18.69 μg/mL，RSD为0.38%(n=6)，表明所建立的方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取上述重复性试验样品1份，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，记录峰面积，计算RSD为1.96%，表明行CRRT患者超滤液中，莫西沙星在实验条件下24 h内稳定性良好。

2.8 回收率试验 取行CRRT患者使用莫西沙星前的超滤液(阴性对照溶液)，分别精密量取浓度为20.00 μg/mL的对照品溶液0.8、1.0、1.2 mL各3份(n=9)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算回收率。结果平均回收率为98.74%，RSD为0.76%。见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.9 样品测定 取行CRRT患者一次给莫西沙星(给药剂量0.4 g)前1 h至给药后11.5 h时间，每2.5小时取样，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算，结果见表2。

表2 超滤液样品测定结果

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 目前对莫西沙星的含量测定方法的报道较多，主要采用HPLC和LC-MS/MS方法测定[4-8]。高效液相方法简单、快速、结果准确，已越来越多地应用于莫西沙星血药浓度、莫西沙星注射液、胸腔积液中莫西沙星浓度的测定。参阅文献后，选择Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)，检测波长293 nm，柱温25 ℃。试验验证，该色谱条件应用于CRRT超滤液中莫西沙星的含量测定，操作简单、快速，结果准确，重复性好。

3.2 样品处理方法的选择 本研究采集ICU患者行CRRT超滤液样品检测。文献中对莫西沙星血浆样品和胸腔积液样品均采用了液液萃取、离心浓缩的方法，进行纯化和富集[4,6]。但由于本研究的样品为超滤盐溶液，体积较大，药物浓度低，患者一次行CRRT治疗时间长，样品数量较多，样品富集和易于批量处理成为样品前处理的一个难点。本试验考察了氮气吹干、离心浓缩、冷冻干燥三种方法，经对比发现，冷冻干燥具有操作简单、处理时间短、可批量处理样品等显著优势，最终选择了冷冻干燥处理方法。

3.3 抗菌药物的选择 抗菌药物的合理应用一直是各临床科室广泛关注的重点。而多项Meta分析结果显示，莫西沙星是第四代氟喹诺酮类药物，具有广谱、高效、抗耐药性强、不良反应较小等优势，在肾功能不全患者中应用较多[9-11]。本课题组前期对行CRRT患者的超滤液进行研究，发现行CRRT对药物的清除情况影响较大，莫西沙星在这部分患者中应用较多，因此，本研究对行CRRT患者使用莫西沙星后超滤液研究，为其剂量调整提供重要依据。

3.4 本方法应用于ICU行CRRT患者一次给莫西沙星(给药剂量0.4 g)前1 h至给药后11.5 h的超滤液样品测定，给药后，超滤液中莫西沙星的浓度呈现先迅速提高、后缓慢下降的趋势，在给药9 h后下降明显，预计与莫西沙星的血药浓度呈正相关，11.5 h累计滤器清除莫西沙星0.14 g，滤器清除率高达35%，提示该患者的莫西沙星给药剂量增加且给药时间间隔缩短。

[1] 王薇,匡长春,刘祖雄,等.莫西沙星临床应用研究进展[J].中国药业,2010,19(1):61-62.

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Determination of moxifloxacin in ultra-filtrate liquid of continuous renal replacement therapy (CRRT) by HPLC and its application

LI Chun-tong,LI Xiang*,ZHOU Liang,WANG Xin-hui,ZHANG Mei-fang

(Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of moxifloxacin in continuous renal replacement therapy (CRRT) ultra-filtrate liquid of patients in intensive care unit,to reflex the clearance of the filter and to provide a basis for its dosage adjustment.Methods Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm) column was chosen for analysis.The mobile phase consisted of methanol and water (40∶60).The flow rate was 1.0 mL/min with the detection wavelength set at 293 nm;the temperature was set at 25 ℃;the injection volume was 10 μL;the running time was 6 min.Results A good linear correlation of moxifloxacin was observed within the range of 2.000～60.00 μg/mL (r=0.999 9).The average recovery was 98.74% (n=9),RSDwas 0.76%.Conclusion The method is rapid,convenient,accurate,robust and suitable for determination of moxifloxacin concentration in ultra-filtrate liquid of continuous renal replacement therapy (CRRT).It can be used to reflex its clearance by filter.

Continuous renal replacement therapy;Ultra-filtrate liquid;Moxifloxacin;HPLC

2016-08-03

解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京100048

北京药学会基金2014年研究项目

10.14053/j.cnki.ppcr.201703021

*通信作者