曹留霞，武涧松，徐晓丹，贺 丹

EGCG对A549细胞炎性反应模型UBC9表达的影响

曹留霞，武涧松，徐晓丹，贺 丹

目的 观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9，UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导A549细胞中的表达，探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。方法 根据筛选结果随机分为对照组、EGCG组、LPS组、EGCG+LPS组4个组,MTT检测不同浓度的EGCG(50～400 μg/ml)和LPS(10～50 μg/ml)对A549细胞增殖活性的影响，筛选最佳作用浓度，进一步通过免疫组化染色法、蛋白质印迹法和Realtime-PCR检测分析各处理组UBC9蛋白及其mRNA的相对表达量。结果 MTT显示，200 μg/ml的EGCG细胞增殖抑制作用最强(F=1618.18，P<0.001)，LPS 25μg/ml细胞增殖活性最明显(F=237.38，P<0.001)。免疫组化与蛋白质印迹检测均显示，与对照组比较，EGCG下调A549细胞UBC9蛋白表达(P<0.001)，LPS则上调UBC9表达量(P<0.001)，与LPS组比较，EGCG+LPS组UBC9蛋白表达明显降低(P<0.001)。同样，Realtime-PCR显示，与对照组比较，EGCG组UBC9 mRNA表达下调(F=89.34，P<0.001)，LPS组UBC9 mRNA表达上调(F=225.00，P<0.001)，与LPS组比较，EGCG+LPS组UBC9 mRNA的表达受到抑制，显著降低(F=625.00，P<0.001)。结论 EGCG下调LPS刺激的炎性反应模型的UBC9的表达，其抗炎机制可能与抑制UBC9蛋白与mRNA表达有关。

表没食子儿茶素没食子酸酯；脂多糖；泛素连接酶9；炎性反应

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是绿茶提取物茶多酚的主要活性成分。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是细菌内毒素的主要成分，可刺激组织细胞增生，激发多种炎性物质释放，诱导炎性反应的发生。泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9，UBC9) 作为类泛素化修饰中的关键酶，在肿瘤发生发展起重要作用[1],已有研究发现UBC9在人类多种肿瘤中呈高表达[2,3]，如乳腺癌、头颈部肿瘤、肺癌。炎性反应是导致癌症发生发展的重要因素，被认为是癌症的第七特征[4,5]。有研究报道，EGCG对肺癌[6]、肝癌[7]、鼻咽癌[8]、宫颈癌[9]等肿瘤细胞均有抑制作用，但EGCG抗癌效应是否与抗炎有关以及具体机制的研究目前尚未见报道。本研究通过探讨EGCG对LPS诱导的人肺腺癌上皮细胞株A549细胞炎性反应模型的作用及是否与调节UBC9蛋白与mRNA的表达量有关，旨在为临床癌症诊疗提供新的生物指标。

1 材料与方法

1.1 材料 人肺腺癌上皮细胞株……