徐新蕊　单文静　吴健

[摘要] 目的 建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法同时测定乌头汤中8种成分的定量方法。 方法 选用Waters Acquilty UPLC C18 column（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色谱柱，以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相。质谱条件：电喷雾离子（ESI）源，采用多反应检测模式（MRM）对乌头汤中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、芍药苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-Glu、甘草苷、甘草酸铵、麻黄碱进行定量分析。 结果 苯甲酰乌頭原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、芍药苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-Glu、甘草苷、甘草酸铵、麻黄碱等8种成分的线性范围分别为0.014～0.229、0.384～0.003、0.007～0.922、1.072～137.321、0.055～7.084、0.148～18.974、0.204～26.226、0.038～4.951 μg/mL，r2>0.9990，精密度相对标准偏差（RSD）分别为1.31%、1.52%、1.42%、1.56%、1.47%、1.59%、1.61%、1.57%。重复性RSD分别为2.4%、2.6%、2.7%、2.5%、3.1%、3.5%、2.3%、3.4%。回收率依次为92.68%、91.99%、92.79%、96.71%、97.19%、96.79%、98.15%、96.09%，RSD<2.15%。 结论 该方法快速、简便、重复性好，可用于同时测定乌头汤中的8种成分以及乌头汤的质量控制。

[关键词] 乌头汤；超高效液相色谱；三重四极杆质谱；多反应检测模式；质量控制

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）01（c）-0147-05

[Abstract] Objective To establish a quantitative method of simultaneous determination of 8 major components in Wutou Decoction by ultra-high performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry. Methods Waters Acquilty UPLC C18 column （2.1 mm×100 mm， 1.7 μm） was selected as chromatographic column， aqueous solution of acetonitrile-1% acetic acid was taken as mobile phase. The conditions of mass spectrum： electrospray ions （ESI） source， multiple reaction monitoring （MRM） was used to take quantitative analysis of benzoylaconitine， benzoylhypaconitine， benzoylmesaconine， paeoniflorin， calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside， liquiritin， ammonium glycyrrhetate， ephedrine in Wutou Decoction. Results The linearity range of 8 major components of benzoylaconitine， benzoylhypaconitine， benzoylmesaconine， paeoniflorin， calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside， liquiritin， ammonium glycyrrhetate， ephedrine was 0.014-0.229， 0.384-0.003， 0.007-0.922， 1.072-137.321， 0.055-7.084， 0.148-18.974， 0.204-26.226， 0.038-4.951 μg/mL respectively， r2>0.9990. The relative standard deviation （RSD） of precision was 1.31%， 1.52%， 1.42%， 1.56%， 1.47%， 1.59%， 1.61%， 1.57% respectively. The repeatability of RSD was 2.4%， 2.6%， 2.7%， 2.5%， 3.1%， 3.5%， 2.3%， 3.4% respectively. The recovery rate was 92.68%， 91.99%， 92.79%， 96.71%， 97.19%， 96.79%， 98.15%， 96.09% respectively， RSD<2.15%. Conclusion This method is rapid， simple and convenient， with good repeatability， which can be used for the simultaneous determination of 8 major components in Wutou Decoction and the quality control of Wutou Decoction.

[Key words] Wutou Decoction； Ultra-high performance liquid chromatography； Triple quadrupole mass spectrometry； Multiple reaction monitoring； Quality control

乌头汤出自《金匮要略》，由制川乌、麻黄、炙甘草、白芍、黄芪组成，具有温经散寒、祛湿镇痛的功效，主治寒湿痹证[1-3]。制川乌虽是有毒之品，在临床上却广泛应用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、麻醉镇痛等[4-6]。国内外就乌头汤中有效成分的测定及其在治疗类风湿性关节炎的客观内在规律中进行了多层次的研究，并取得了一定的进展[7-20]，但鲜见关于乌头汤方剂质量标准或物质基础的研究报道。本研究采用超高效液相色谱法对乌头汤中8种有效成分同时进行定量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1290高效液相色谱仪，Agilent 6460质谱检测器；BandelinSonorex RK 1208BH超声波清洗器（德国）；HWS 24型电热恒温水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司；Milipore超纯水机；美国Mililpore公司METTLER Toledo AB265-S电子天平（瑞士）。