徐硕　徐文峰　金鹏飞

[摘要] 目的 应用高效液相色谱（HPLC）技术，建立同时测定复方褪黑激素片中维生素B6和褪黑激素含量的方法。 方法 采用Alltima C18色谱柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm），以50 mmol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调至pH 3.0）-乙腈为流动相，梯度洗脱，流速0.5 mL/min，检测波长278 nm，柱温30℃，进样体积10 μL，对复方褪黑激素片中的维生素B6和褪黑激素进行含量测定。结果 维生素B6和褪黑激素检测浓度分别在80.34～401.7 mg/L（r=0.9997）和8.50～42.5 mg/L（r=0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系；精密度和稳定性良好，相对标准偏差（RSD）均<0.8%；回收率良好，维生素B6和褪黑激素的平均回收率（n=9）分别为100.4%和98.86%，RSD分别为0.42%和0.86%。复方褪黑激素片中维生素B6平均含量为14.14 mg/片，褪黑激素平均含量为0.9853 mg/片。 结论 该方法准确、简单、快速，可用于同时测定复方褪黑激素片中维生素B6和褪黑激素的含量。

[关键词] 维生素B6；褪黑激素；高效液相色谱；含量测定

[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）01（c）-0142-05

[Abstract] Objective To develop a high performance liquid chromatography （HPLC） method for the simultaneous determination of vitamin B6 and melatonin in Compound Melatonin Tablets. Methods An Alltima C18 column （150 mm × 4.6 mm， 5 μm） was used for the separation， with gradient elution of 50 mmol/L ammonium dihydrogen phosphate （adjusted pH to 3.0 with H3PO4） and acetonitrile as the mobile phase at the flow rate of 0.5 mL/min. The detection wavelength was set at 278 nm. The column temperature was 30℃ and injection volume was 10 μL. Vitamin B6 and melatonin in Compound Melatonin Tablets were quantified by the established method. Results The liner range of vitamin B6 and melatonin was 80.34-401.7 mg/L （r=0.9997） and 8.50-42.5 mg/L （r=0.9999） respectively. The precision and stability were satisfactory， and the relative standard deviation （RSD） were less than 0.8%. The average recoveries （n=9） was 100.4% （RSD=0.42%） and 98.86% （RSD=0.86%） for vitamin B6 and melatonin respectively. The average contents of vitamin B6 and melatonin in Compound Melatonin Tablets were 14.14 mg/tablet and 0.9853 mg/tablet. Conclusion The established method is accurate， simple and rapid， and can be utilized for simultaneous determination of vitamin B6 and melatonin in Compound Melatonin Tablets.

[Key words] Vitamin B6； Melatonin； HPLC； Determination

褪黑激素（melatonin，MLT）化學名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺，主要是由哺乳动物和人类松果体产生、分泌的一种吲哚类物质[1-2]。褪黑激素是一种人体内分泌系统的调节剂，可将内源性生物节律的周期、位相调整到与环境周期同步，具有镇静、催眠、调节睡眠-觉醒、改善时差反应综合征的作用。在延续人体衰老和抵抗老年性疾病方面具有一定作用，某些肿瘤和神经系统疾病的发生、发展也与褪黑激素的独特昼夜排泌节律相关[1，3-6]。维生素B6对智力和体力的提高具有促进作用，能调节血液中的葡萄糖水平，维持甲状腺、肾上腺和性腺的正常功能，改善大脑物质的新陈代谢[7-9]。复方褪黑激素片是以高纯度的褪黑素、维生素B6为原料制成的具有改善睡眠作用的保健品，适用于失眠者、睡眠质量差、易惊醒者，片剂中加入维生素B6有助于提高免疫力。

随着生命科学研究的不断深入，人工合成褪黑激素的工艺已完成，该物质作为保健食品被广泛应用。……