赵俊军,吕 娇,李 平

(1.大连市中心医院 病理科，辽宁 大连116023;2.山东医学高等专科学校病理学与病理生理学教研室，山东 临沂276000)

Cripto-1蛋白、E-钙粘蛋白和波形蛋白在乳腺癌中的表达及其意义

赵俊军1,吕 娇2,李 平1

(1.大连市中心医院 病理科，辽宁 大连116023;2.山东医学高等专科学校病理学与病理生理学教研室，山东 临沂276000)

目的 研究Cripto-1蛋白、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)在乳腺癌中的表达情况及意义，探讨Cripto-1蛋白与上皮-间质转化(EMT)在乳腺癌的侵袭与转移过程中的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测86例乳腺癌和40例癌旁组织中Cripto-1蛋白的表达及86例乳腺癌中E-cadherin和Vimentin蛋白表达情况，分析Cripto-1、E-cadherin和Vimentin的蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系及Cripto-1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相关性。结果 在86例乳腺癌和40例癌旁组织中Cripto-1的阳性率分别为66.3%和7.5%，E-cadherin的低表达率和Vimentin的高表达率在乳腺癌中分别为24.4%和54.6%。Cripto-1的表达与HER2阳性、有淋巴结转移和高组织学分级有关(P<0.05)；E-cadherin的低表达与患者年龄、有无淋巴结转移和组织学分级有关(P<0.05)；Vimentin的高表达与肿瘤大小、有无淋巴结转移和组织学分级有关(P<0.05)。Cripto-1的表达与E-cadherin低表达和Vimentin的高表达之间呈显著正相关(P<0.05)。结论 Cripto-1蛋白在乳腺癌中的阳性率高；Cripto-1可能通过调控E-cadherin和Vimentin的表达来促进EMT，进而在乳腺癌的侵袭和转移过程发挥重要作用。

乳腺癌；Cripto-1；EMT；E-cadherin；Vimentin；免疫组织化学

(ChinJLabDiagn,2017,21:0017)

上皮-间质转化(EMT)在肿瘤的浸润与转移中扮演着重要角色。近几年的研究表明，Cripto-1信号通路可能与EMT现象之间存在交互关系，促进肿瘤的侵袭与转移过程。本研究通过检测Cripto-1蛋白及EMT相关因子E-cadherin和Vimentin在乳腺癌中的表达，探讨乳腺癌中Cripto-1的表达与EMT在乳腺癌中发展过程的关系，

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集大连市中心医院病理科2009年至2012年乳腺癌根治术标本86例和癌旁组织40例，年龄31-85岁，平均58岁；行腋淋巴结清扫术发现39例淋巴结转移；组织学分级Ⅰ级者7例，Ⅱ级者51例，Ⅲ级者28例；所有病例均为首发病例，术前均未行放化疗和靶向治疗。

1.2 方法 采用ElivisioTMplus法进行免疫组织化学染色。浓缩型兔抗人 Cripto-1 多克隆抗体购自美国 SANTA CRUZ 公司，Cripto-1阳性表达于细胞膜或细胞质上，以≥25%为阳性表达(见图1)。E-cadherin 鼠抗人单克隆抗体和vimentin 鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。E-cadherin表达于细胞膜上，以≤90%判定为E-cadherin低表达(见图2)；>90%判定为E-cadherin表达保留。Vimentin表达于细胞质中，以≤20%判定为Vimentin蛋白低表达；>20%判定为Vimentin蛋白高表达(见图3)。ER和PR分别以细胞核阳性细胞数<10%为阴性表达，阳性细胞数≥10%为阳性表达(见图4和5)。HER2以≥30%有强而完整细胞膜染色为阳性(见图6)，<30%有强而完整细胞膜染色为阴性。Ki67<15%为阴性,Ki67≥15%为阳性(见图7)。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行数据分析。不同组之间的比较用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析数据，P<0.05认为差异显著具有统计学意义。

图1 Cripto-1蛋白阳性表达(10×20) 图2 E-cadherin蛋白低表达(10×20) 图3 Vimentin蛋白高表达(10×20)

图4 ER阳性表达(10×20) 图5 PR阳性表达(10×20) 图6 HER2阳性表达(10×20) 图7 Ki67阳性表达(10×20)

2 结果

2.1 Cripto-1蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系

Cripto-1蛋白在86例乳腺癌和40例癌旁组织中的阳性率分别为66.3%(57/86)和7.5%(3/40)(χ2=37.816，P=0.000<0.05)。Cripto-1的表达与HER2状态(χ2=6.712，P=0.010<0.05)、淋巴结转移(χ2=17.580，P=0.000<0.05)及组织学分级(χ2=9.573，P=0.006<0.05和χ2=5.312，P=0.021<0.05)之间显著相关。也就是说，Cripto-1蛋白在乳腺癌中阳性率高；HER2阳性的患者Cripto-1的表达高于HER2阴性者；有淋巴结转移的患者Cripto-1的表达高于无淋巴结转移者；组织学分级Ⅲ级者Cripto-1的表达较Ⅰ、Ⅱ级者升高，Cripto-1表达与其他临床病理特征之间的比较均无统计学意义(见表1)。

2.2 E-cadherin蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系

在24.4%(21/86)的乳腺癌中出现E-cadherin表达降低。E-cadherin的表达降低与淋巴结转移(χ2=5.095，P=0.024<0.05)和组织学分级(χ2=10.225，P=0.001<0.05)之间显著相关，即淋巴结转移者E-cadherin的表达较无淋巴结转移者降低；组织学分级Ⅲ级者E-cadherin的表达较Ⅱ级者降低，而E-cadherin表达与其他临床病理特征之间的比较均无统计学意义；(见表2)。

表1 Cripto-1蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系

表2 E-cadherin在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系

2.3 Vimentin蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系

在54.6%(47/86)的乳腺癌中出现Vimentin表达升高。Vimentin的表达升高与淋巴结转移(χ2=8.463，P=0.004<0.05)和组织学分级(χ2=5.016，P=0.025<0.05和χ2=8.842，P=0.006<0.05)之间显著相关，即淋巴结转移者Vimentin的表达较无淋巴结转移者升高；组织学分级Ⅲ级者Vimentin的表达较Ⅰ、Ⅱ级者升高，而Vimentin表达与其它临床病理特征之间的比较均无统计学意义(见表3)。

表3 Vimentin在乳腺癌中的表达与临床病理特征的关系

2.4 Cripto-1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相关性

Cripto-1的高表达与E-cadherin的低表达和Vimentin的高表达呈显著正相关(r=0.234,P=0.030<0.05；r=0.289,P=0.007<0.05)；E-cadherin的低表达与Vimentin的高表达呈正相关(r=0.246,P=0.023<0.05)，也就是说Cripto-1阳性表达增高的同时出现E-cadherin的表达下降和Vimentin的表达升高(见表4)。

表4 Cripto-1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相关性

3 讨论

癌细胞的侵袭和转移是肿瘤进展，同时也是癌症患者死亡的主要原因[1]。尽管乳腺癌患者通过手术及规范化的治疗提高了生存率，但仍有一些患者出现侵袭及转移。转移性乳腺癌患者的5年生存率较40年前相比，只从20%提高到目前的26%，而且乳腺癌患者几乎都死于转移[2]。癌基因与抑癌基因的调节功能失衡是肿瘤发生及发展的重要因素，针对相关癌基因的分子靶向治疗在肿瘤患者的治疗中越来越重要[3-5]，对乳腺癌侵袭和转移机制的研究成为目前乳腺肿瘤研究的热点问题。

EMT是一种基本的病理生理现象，参与胚胎的形成与发育及肿瘤的侵袭与转移过程。EMT现象被证实在多种恶性肿瘤中都存在，EMT相关标志物的表达与肿瘤的侵袭与转移显著相关[6,7]。E-cadherin是重要的上皮细胞标志物，研究发现[8]，E-cadherin表达的部分缺失或完全缺失与乳腺癌的低分化、高侵袭性及临床预后差密切相关。给予外源性的E-cadherin虽然并不足以使间质细胞表型逆转，但能够抑制乳腺癌的转移[9、10]。Vimentin是EMT重要的间质细胞标志物，其在维持间质特性中发挥重要作用。研究证实[11]，Vimentin表达的增加与肿瘤的侵袭转移特性也具有普遍联系。Vimentin的高表达与多个乳腺癌细胞系的侵袭与转移密切相关，被认为与其他间质标记物共同发挥着调节作用。本实验分析了E-cadherin和Vimentin的表达与乳腺癌临床病理特征的关系中发现，E-cadherin的表达降低、Vimentin的表达升高发生于有淋巴结转移和高组织学分级者，提示乳腺癌中可能存在EMT现象且在乳腺癌的侵袭与转移过程中发挥重要作用。

Cripto-1基因为表皮生长因子-CFC(EGF-CFC)家族成员之一，在促进早期胚胎发育与形成、细胞分化及肿瘤的发展过程中起着重要作用。Cripto-1蛋白具有癌基因特性，在成人中一般不表达，当细胞发生恶变时又重新表达。Cripto-1作为重要的癌基因生长因子，可能在癌细胞的侵袭和转移、EMT、和促进肿瘤血管形成等方面发挥着重要作用[12]。研究发现[13]，在胃癌中Cripto-1过表达及E-cadherin表达缺失与淋巴结转移，远处转移以及肿瘤分期显著相关。本研究在分析Cripto-1的表达与乳腺癌临床病理特征的关系时发现，Cripto-1的表达与HER2阳性、高组织学分级及有淋巴结转移显著相关，在淋巴结转移灶中的表达水平明显高于原发灶。这与文献报道[14]一致。提示Cripto-1 可能在乳腺癌的侵袭和转移过程中发挥重要作用。

本实验发现，乳腺癌中Cripto-1阳性表达增高的同时出现E-cadherin的表达下降和Vimentin的表达升高的现象。我们对Cripto-1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达之间的相关性进行了分析，结果发现乳腺癌中Cripto-1的表达与E-cadherin低表达和vimentin高表达之间呈显著正相关。表明Cripto-1与EMT之间可能存在着某些潜在的联系，提示Cripto-1可能通过调控E-cadherin和Vimentin表达来促进EMT，从而在促进乳腺癌的侵袭与转移过程过程中发挥重要作用。另外，在Cripto-1转基因小鼠的研究中也同样表明[15]，Cripto-1过表达的肿瘤细胞转移能力增加的主要原因是由于Cripto-1促进了EMT相关分子标志物的表达。

总之，Cripto-1蛋白和EMT现象与乳腺癌的侵袭和转移相关。进一步深入研究Cripto-1和EMT现象在乳腺癌发生与发展过程中的作用机制，将为乳腺癌的生物治疗及预后判断提供新的思路和新的靶点。

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Expression and significance of Cripto-1,E-cadherin and Vimentin in breast cancer

ZHAOJun-jun1,LVJiao2,LIPing1.

(1.DepartmentofPathology,DalianCentralHospitalDalian116023,China;2.DepartmentofPathologyandpathophystalogy,ShandongMedicalCollege,Linyi276000,China)

Objective To investigate the significance of Cripto-1,E-cadherin and Vimentin expressions in breast cancer,and to study the significance of Cripto-1 which may play an important role in Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) and its prognosis in breast cancer.Methods Immunohistochemistry (ElivisioTMplus) method was used to detect Cripto-1 expression in 86 cases of breast cancer and 40 cases of non-cancerous tissues surrounding tumors,and also detect E-cadherin,Vimentin in 86 cases of breast cancer,Then the association between Cripto-1,E-cadherin,Vimentin expressions and clinical pathological characteristics as well as the correlation between among Cripto-1,E-cadherin,Vimentin expressions were analyzed.Results The positive expression rates of Cripto-1 in breast cancer and non-cancerous tissues surrounding tumors were 66.3% and 7.5% respectively,and the low E-cadherin expression as well as the high Vimentin expression in breast cancer were 24.4% and 54.6% respectively.The expression of Cripto-1 protein was significantly associated with HER2、lymph node metastasis and Histological grade (P<0.05);the expression of E-cadherin protein was significantly associated with age、lymph node metastasis and Histological grade (P<0.05);the expression of Vimentin protein was significantly associated with the size of tumor,lymph node metastasis and Histological grade (P<0.05).The expression of Cripto-1 was closely correlated with low expression of E-cadherin (r=0.234;P<0.05)and the high expression of Vimentin(r=0.289;P<0.05).On the other hand,the low expression of E-cadherin was closely correlated with that high of Vimentin(r=0.246;P<0.05).Conclusion The positive rates of Cripto-1 expression were significantly higher in breast cancer.What is more,Cripto-1 may promote EMT through the regulation of the expression of E-cadherin and Vimentin,thereby clearly showing that it plays an important role in invasion and metastasis of breast cancer.

Breast cancer;Cripto-1;EMT;E-cadherin;Vimentin;Immunohistochemistry

1007-4287(2017)01-0017-06

R737.9

A

赵俊军，女，50岁，硕士学位，副主任医师，研究方向：乳腺、妇科等肿瘤病理诊断。

2015-10-21)