谷 洋，刘志毅，金 虎，刘 明，孙铁梁

(吉林大学第四医院 普通外科，吉林 长春130011)

pAdKDR/CD/TK双自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用的试验研究

谷 洋，刘志毅*，金 虎，刘 明，孙铁梁

(吉林大学第四医院 普通外科，吉林 长春130011)

目的 探讨含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法 观察不同前药对HepG2细胞、血管内皮细胞ECV304和LST174细胞的杀伤作用，评估KDR启动子的靶向杀伤作用。观察不同前药对转染不同自杀基因的HepG2细胞的杀伤作用，及旁观者效应。结果 转染腺病毒的HepG2细胞及血管内皮ECV304细胞对前药具有较高的敏感性，而感染腺病毒的LST174细胞对前药不敏感(P<0.05)。当转染细胞混合比例为50%时，应用前药后，转染CD/TK,CD,TK的HepG2细胞生存率分别为11.8±1.2%、41.3±3.7%、43.1±2.3%(P<0.05)。结论 含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞具有高度靶向杀伤作用；联合用药对转染双自杀基因的肝癌HepG2细胞具有协调增强杀伤作用。

双自杀基因； KDR启动子；肝癌细胞;基因

(ChinJLabDiagn,2017,21:0132)

肝癌是我国常见的恶性肿瘤，恶性程度高，外科手术治疗效果差。近年来，随着基因治疗肿瘤的深入研究，自杀基因治疗肿瘤成为研究热点，双自杀基因能够产生两种基因的互补增效的作用，我们联合应用TK/GCV,CD/5-FC，研究KDR启动的双自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

重组腺病毒(吉林大学)，肝癌细胞HepG2(北京细胞研究所)，转染试剂PolyFect (Qiagen 公司) GCV (Roche Pharma 公司) DMEM、RPMI 1640、MTT、小牛血清( Gibco 公司),5-FC(Sigma 公司)。

1.2 HepG2细胞的培养

①10 ml PRMI1640细胞生长液，37℃水浴，体积分数70%乙醇浸泡去除污染。将细胞悬液离心(200×g)，5 min，加入5 ml新鲜细胞生长液。新鲜PRMI 1640细胞培养液10 ml，细胞悬液5 ml，37℃，5%CO2；细胞70%时行1∶3传代。用磷酸盐缓冲溶液(PBS)10 ml清洗细胞，灭活Tyrosine，新鲜PRMI 1640细胞生长液8.5 ml，新鲜PRMI 1640细胞液9 ml，细胞悬液1 ml，37℃下孵育，体积分数5%CO2。细胞70%汇合传代。

1.3 重组腺病毒对HepG2细胞、LST174细胞和血管内皮细胞ECV304的感染率测定

取对数生长期的上述三种细胞培养板，体积分数5%，CO2，37℃，加入不同感染复数的目的腺病毒pAdKDR/CD/TK ，3 d后在荧光显微镜下计数GFP阳性细胞百分比。……