陈颖璐,石亚伟

(山西大学生物技术研究所,教育部化学生物学与分子工程重点实验室,山西太原 030006)



亚麻种子中胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

陈颖璐,石亚伟*

(山西大学生物技术研究所,教育部化学生物学与分子工程重点实验室,山西太原 030006)

将亚麻种子去壳粉碎,经丙酮脱脂和Tris-HCl缓冲液提取后,Q-SepharoseTMFast flow离子交换层析一步纯化,获得电泳纯的亚麻胰蛋白酶抑制剂(LUTI),纯化倍数可达9.62,活力回收率为6.25%,比活力为55.35 U/mg,SDS-PAGE电泳显示LUTI分子量大小约为8 ku。质谱鉴定属于Potato型胰蛋白酶抑制剂,其抑制活性在pH2.0～6.0以及70 ℃以下有较好的稳定性,最适pH为6.0,最适温度为40 ℃,属于一种非竞争性抑制剂,Ki值为9.18×10-4mol/L。DTNB法检测LUTI含有一对二硫键,二硫键存在有助于提高LUTI的稳定性和活性。

亚麻种子,胰蛋白酶抑制剂,分离纯化,酶活测定

亚麻(LinumusitatissimumL.)是一种亚麻科亚麻属的一年生草本植物[1],在我国西北,华北地区种植广泛。亚麻籽中含有多种生物活性物质:亚麻蛋白、亚麻酸、木酚素以及亚麻胶等[2]。亚麻籽中粗蛋白含量可达到23%～33%,主要为球蛋白和白蛋白,是植物中优质蛋白,具有很高的食用和医药价值[3]。

胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitor,TI)是一类可以抑制胰蛋白酶水解活性的小分子多肽,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族,广泛存在于植物、动物和微生物中[4]。胰蛋白酶抑制剂的传统来源为豆科植物和动物肝脏[5],在植物贮藏器官中,其含量通常高达总蛋白的10%左右[6]。Bowman-Birk于1944年首次从大豆中提取出大豆胰蛋白酶抑制剂(BBI)[7],近年来也陆续从其他豆类作物如豇豆、菜豆以及黑豆种子[8-10]和谷类作物荞麦、莜麦[11-12]种子中分离出不同类型的胰蛋白酶抑制剂。……