魏 霜,马新华,汪天杰,龙 阳,纪 强,任 娇,吴希阳

(1.汕头出入境检验检疫局,广东汕头 515041;2.暨南大学理工学院食品科学与工程系,广东广州 510632;3.湛江出入境检验检疫局,广东湛江 524022;4.广州出入境检验检疫局,广东广州 510632)



双重DPO-PCR检测副溶血弧菌和霍乱弧菌

魏 霜1,2,马新华3,汪天杰4,龙 阳3,纪 强1,任 娇1,吴希阳2,*

(1.汕头出入境检验检疫局,广东汕头 515041;2.暨南大学理工学院食品科学与工程系,广东广州 510632;3.湛江出入境检验检疫局,广东湛江 524022;4.广州出入境检验检疫局,广东广州 510632)

根据副溶血弧菌collagenase基因和霍乱弧菌ompW基因,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立一种快速检测这两种弧菌的多重DPO-PCR方法,并对其特异性和灵敏度进行了评价。结果显示,设计的DPO引物特异性较强,副溶血弧菌和霍乱弧菌DNA可分别扩增出307 bp与463 bp的特异性条带,检测灵敏度均达0.1 ng/μL。该检测方法对退火温度不敏感。利用该方法对69株疑似弧菌菌株进行鉴定,结果与生理生化鉴定结果一致。该方法特异性强、灵敏度高,适合于对食品、水产品等中副溶血弧菌和霍乱弧菌的进行快速筛检。

副溶血弧菌,霍乱弧菌,多重DPO-PCR

传统检测方法特异性差、灵敏度低并且耗时长、操作繁琐、满足不了快速检测的需求。PCR技术具有快速、特异性强和灵敏度高等特点,是目前食源性致病菌检测主要采用的检测技术之一[10]。在此基础上,DNA探针技术[11]、普通多重PCR(Multiplex PCR)[12]、多重荧光定量PCR(Multiplex real-time PCR)[13]、PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)[14]等检测方法也已建立起来,但是这些方法有些对引物设计的要求很高,而且需要优化退火温度,有些则需依赖较昂贵的仪器设备,难以在实验室推广。……