徐晓平 许健波 胡俊青

头孢米诺和头孢美唑对产与不产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科体外抗菌活性的研究

徐晓平 许健波 胡俊青

目的 评价头孢米诺和头孢美唑对肠杆菌科大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的体外抗菌活性。方法 收集2014年1月至2015年12月临床科室分离出非重复的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌500例，采用琼脂稀释法测定头孢米诺和头孢咪唑的最低抑菌浓度（MIC），将数据输入WHONET5.4进行耐药性分析。结果 500株大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中不产酶菌株179株（35.8%），单产ESBLS株277株（55.4%），单产AmpC株12株（2.4%），产ESBLS+AmpC株32株（6.4%），头孢米诺和头孢美唑对不产酶和单产ESBLS的大肠埃希菌和肺炎克雷波菌具有良好的抗菌活性；头孢米诺和头孢美唑对产AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌抗菌活性差。结论 头孢米诺和头孢美唑对不产酶和单产ESBLS的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌具有良好的抗菌活性，提示头孢米诺和头孢美唑可用于上述敏感菌的治疗。【关键词】 头孢米诺 头孢美唑 头霉素类 超广谱β-内酰胺酶 抗菌活性

肠杆菌科细菌是临床感染性疾病中最重要的致病菌，其中以大肠埃希菌（E.coli）和肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella p）分居第一和第二位［1］。随着第三代﹑四代头孢菌素的大量使用，细菌产生了耐药作用，其中最重要的机制是产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLS）和AmpC酶［2］。ESBLs可水解大多数青霉素类，头孢菌素类和β内酰胺类抗生素，亦可能同时对其它的抗菌药物如氟喹诺酮类和氨基糖苷类产生耐药性。而头孢米诺和头孢美唑是较新的半合成头霉素类抗生素，抗菌谱广，对多种革兰阳性菌﹑革兰阴性菌及厌氧菌有较强的抗菌作用，包括产β内酰胺的菌株。本资料通过测定头孢米诺和头孢美唑及对照药物对大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的敏感性与耐药性比较不同抗菌药物的体外抗菌活性。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）菌株来源：收集2014年1月至2015年12月本院患者临床感染标本中分离到的319株大肠埃希菌和181株肺炎克雷伯杆菌，标本来源包括血液﹑尿液﹑痰﹑脓液﹑引流液﹑﹑肺泡灌洗液﹑腹水和胆汁等。对每例患者同一部位中分离的同一种菌，留取首次分离的菌株，所有菌株均由全自动微生物鉴定系统鉴定。药敏质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC 27853。（2）抗菌药物：头孢美唑购自日本第一-三制药有限公司，头孢米诺购自日本明治制果株式会社，哌拉西林购自山东齐鲁制药厂，头孢噻肟购自华北制药凯瑞特药业有限公司，头孢哌酮购自辉瑞制药有限公司，氨曲南﹑头孢吡肟购自中美上海施贵宝公司，头孢他啶购自英国葛兰素史克制药公司，左氧氟沙星购自北京第一制药厂，头孢西丁﹑阿莫西林﹑阿米卡星﹑克拉维酸﹑舒巴坦购自中国药品生物制品检定所，亚胺培南购自杭州默沙东制药有限公司，美罗培南购自日本Sumitomo制药公司。（3）药物纸片：均购自美国BBL公司。（4）培养基：使用Mueller-Hinton琼脂，琼脂基质粉均购自美国BBL公司。

1.2 方法 （1）最低抑制浓度（MIC）测定：采用琼脂稀释法测定多种抗菌药物对菌株的MIC值，整个过程参照临床和实验室标准协会（CLSI）文件M7-A7［3］（大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌）推荐的操作方法进行。全部药敏数据结果输入WHONET5.4软件，药敏判定标准参照CLSI M100-S19文件［4］，其中头孢哌酮/舒巴坦的折点参照头孢哌酮，头孢米诺的折点参照头孢美唑。（2）确证试验：大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的超广谱β内酰胺酶（ESBLs）测定按照CLSIM100-S19文件［5］（2009年）推荐的方法进行。头孢噻肟或头孢他啶加入4μg/ml 克拉维酸后MIC比单药降低≥8倍视为菌株产ESBLs。质控菌株为ATCC 70063和ATCC 25922。（3）大肠埃希菌肺炎克雷伯杆菌的AmpC酶检测：对于头孢噻肟/克拉维酸或头孢他啶/克拉维酸MIC≥2μg/ml并且孢西丁耐药的菌株，通过PCR扩增blaampc基因，引物序列参照文献［6-8］进行，部分PCR产物送至上海生工生物工程股份有限公司测序。

2 结果

2.1 大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中ESBLs和AmpC的检出率 大肠埃希菌中单产ESBLs的检出率为57.1%，单产AmpC酶的检出率为2.8%，同时产ESBLs和AmpC酶的检出率为4.4%。肺炎克雷伯杆菌中单产ESBLs的检出率为51.4%，单产AmpC酶的检出率为1.7%，同时产ESBLs和AmpC酶的检出率为9.9%。23株产AmpC的大肠埃希菌中有2株产DHA-1型酶，21株产CMY-2型酶；21株产AmpC的肺炎克雷伯杆菌中17株产DHA-1型酶，4株产CMY-2型酶。

2.2 头孢米诺﹑头孢美唑等药物对大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌体外抗菌活性 头孢米诺﹑头孢美唑等药物对不产ESBLs和AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌具有高度的体外抗菌活性。其中头孢米诺的敏感率为100%，头孢美唑敏感性也高达99.5%；头孢米诺和头孢美唑对单产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的敏感率分别为98.5%﹑97.2%；头孢米诺和头孢西丁对单产AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的敏感率分别为15.5%﹑19.2%，除了亚胺培南和美罗培南外，各抗菌药物对产ESBLs+AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的敏感性较差。

3 讨论

在我国，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为ESBLs的主要肠杆菌科菌，ESBLs由细菌的质粒介导，可水解大多数的青霉素类，头孢菌素类和单环β内酰胺类，亦可能同时对其他的抗生素如氟喹诺酮类和氨基糖苷类产生耐药性。随着临床诊疗中抗生素的越来越广泛和大剂量使用，对抗生素的耐药现象也日益严重，其中产ESBLs是其耐药的最主要机制。

头孢米诺和头孢美唑均为半合成头霉素类抗生素，对革兰阳性菌﹑革兰阴性菌和厌氧菌有光谱抗菌活性。头霉素类抗生索的化学结构式与头孢菌素相似，但在头孢烯母核（7AcA）的7位碳上引入7α-甲氧基，甲氧基对于许多由青霉素酶和头孢菌素酶所引起的抗生素失活提供了高度的保护作用，经化学修饰的基础头霉素核附干侧链，从而增强其对β内酰胺酶和ESBLs的稳定性，使头孢美唑和头孢西丁对上述细菌的抗菌作用优于第二﹑三代头孢菌素，但易被AmpC酶水解破坏［9］。

本资料结果显示，头孢米诺和头孢美唑对受试的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的不产ESBLs和单产ESBLs菌株具有高度抗菌活性。头孢米诺药对不产酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的敏感率为100%。头孢美唑敏感性也较高，达99.5%，β内酰胺类药物中除了哌拉西林敏感性稍低外，其余药物敏感性均较高，碳青霉烯类药物的敏感率为100%，头孢菌素的敏感率＞95%。对于单产ESBLs的两种菌有良好的抗菌活性，头孢米诺﹑头孢美唑和头孢西丁的敏感率分别为98.5%﹑97.2%和50.1%，亚胺培南和美罗培南保持了较高的敏感率（100%）。对于单产AmpC酶和同时产ESBLs和AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌，头孢米诺和头孢美唑的敏感率较低。上述结果提示头孢米诺对ESBLs酶稳定，对产ESBLs菌株的抗菌活性优于测试的头孢菌素类，但对AmpC酶的稳定性差。

总之，头孢米诺和头孢美唑对不产ESBLs酶和产ESBLs酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌有良好抗菌作用；但对产AmpC酶的肠杆菌科细抗菌活性差。若患者系上述敏感菌株所致各种感染，可首先推荐使用以头孢米诺﹑头孢美唑为代表的头霉素类用于其治疗。

［1］ 陈晓婷．拉氧头孢对171株产超广谱β-内酰胺酶菌株的体外抗菌活性观察．北方药学,2014,11(12):105-106．

［2］ 苏国娟,王国庆．阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌AmpC酶和ESBLs的检测及其耐药性研究．中国实验诊断学,2015,19(5):719-722．

［3］ Clinical and laboratory standards institute．M7-A7．Methods for dilution antimierobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically-seventh edition:Approved standard．CLSI,2006．

［4］ Clinical and laboratory standards institute．M100-S19．Performance standards for antimicrobial susceptibility testing,Nineteenth informational supplement． CLSI,2009．

［5］ Clinical and laboratory standards institute．M11-A7．Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria．Appmved Standard-Seventh Edition．CLSI,2007．

［6］ Perez-Perez FJ,Handson ND．Detection of plasmid-mediated AmpC beta-lactamase genes in clinical isolates by using multiplex PCR．J Clin Microbiol,2002,40(6):2153-2162．

［7］ Giakkoupi P,Tambic-Andrasovic A,Vourli S,et al．Transferable DHA-1 cephalosporinase in Escherichia coli．Int J Antimicrob Agents,2006,27(1):77-80．

［8］ Lefevre A,Leflon-Guibout V,Bredin J,et al．Imipenem Resistance in Salmonella enterica serovar Wien related to porin loss and CMY-4 β-lactamase production．Antimicrob Agents Chemother,2003, 47(3): 1165-1168．

［9］ 郭燕,朱德妹,叶信予,等．头孢米诺的体外抗菌作用研究．中国感染与化疗杂志,2014,13(3):201-213．

Objective To evaluate the antimicrobial activity in vitro of cefmetazole and cefminox against Enterobacteriaceae strains such as Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae with extended-spectrum beta-lactamase（ESBLS）producing and non-producing. Methods A total of 500 E.coli and K.pneumoniae were isolated from January 2014 to December 2015. The levels of minimal inhibitory concentration of the agents were determined by agar dilution method. WHONET5.4 were used to analyse the data. Results Of the 500 E.coli and K. Pneumoniae strains ，156（31.2%）produced neither ESBLS nor AmpC，275（55%）produced ESBLS，11（2.2%）produced AmpC，58（11.6%）produced both ESBLS and AmpC. Cefminox showed excellent antibacterial against both ESBLS-negative and ESBLS-positive E.coli and K. Pneumoniae strains. Cefminox demonstrated better antimicrobial activity than that of cefmetazole.The activity of cefminox was poor against AmpC-proceding E.coli and K. Pneumoniae. Conclusion Cefminox has a broad-spectrum antimicrobial activity against both ESBLS-negative and ESBLS-positive E.coli and K. Pneumoniae. These results indicate that cefminox is suitable for the treatment of infection caused by such cefminox-sensitive isolates.

Cefminox Cefmetazole Cephamicins Extended-spectrum beta-lactamase Antibacterial activity

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