■刘 燕张宏福孙 哲 杨 琳 王瑞军

（1.内蒙古农业大学职业技术学院，内蒙古包头014109；2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室，北京100094；3.华南农业大学动物科技学院，广东广州510642；4.内蒙古农业大学动物科学学院，内蒙古呼和浩特010018)

纤维素酶是将纤维素水解成葡萄糖的一组酶的总称，试验证明，完全降解纤维素至少需要三类酶系：内切葡聚糖酶(EG)、外切葡聚糖酶(CBH)、β-葡萄糖苷酶(BG)。木质纤维素中的纤维素主要以结晶状态存在，其中CBH是纤维素水解酶系中唯一可以作用于结晶纤维素的酶组分，因而CBH在木质纤维素水解中的作用相当重要[1]。

丝状真菌木霉属可产生大量纤维素酶，酶系完全，分泌性较好。目前国内外研究较多的是里氏木霉，纤维素酶的各个组分在不同程度上已得到克隆，并且有些基因已在大肠杆菌和酵母中得到了表达[2]。但关于康宁木霉研究较少(Thomas，1988)[3]；同时大部分分子生物学工作中，常以抗性基因作为克隆筛选的标记，这使得在农业和食品工业中应用的菌株，因可能含有位于质粒上的抗性基因，而造成耐药性，增加了耐药性基因向环境传播的可能性[4]。因此，构建饲料级可食性的非抗生素抗性标记的纤维素酶基因重组菌成为重要的研究方向之一。

本研究将康宁木霉AS3.2774纤维素酶CBHⅡ基因进行克隆和测序，与非抗生素抗性的、以thyA基因为选择标记的、可在乳酸菌和大肠杆菌之间穿梭表达的载体pW425t[5]进行重组，并转化入thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coliX13中进行表达，为下一步pW425t-CBHⅡ在基因缺陷型的乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和试验依据。……