葛怀娜,刘珊娜,刘金福,范志华

(1.天津农学院动物科学与动物医院学院,天津 300384;2.天津农学院食品科学与生物工程学院,天津 300384)



李斯特菌噬菌体裂解酶CBD蛋白的克隆与表达

葛怀娜1,2,刘珊娜2,*,刘金福2,范志华2

(1.天津农学院动物科学与动物医院学院,天津 300384;2.天津农学院食品科学与生物工程学院,天津 300384)

单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域(CBD)能够特异识别李斯特菌细胞。本研究将CBDP40基因扩增后插入pET32a(+)载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明,经0.1 mmol/L IPTG诱导的重组大肠杆菌BL21(DE3)在38 ku处有明显诱导条带,与预期蛋白分子量相符。经过超声细胞破碎,重组蛋白CBDP40分布在上清液中,通过镍离子螯合亲和层析纯化重组蛋白，洗脱后的蛋白浓度为0.908 mg/mL。经菌体结合和间接ELISA验证,重组蛋白CBDP40具有生物学活性,即对李斯特菌具有识别功能。CBD蛋白的重组表达、纯化及其活性验证,为深入研究裂解酶的理化性质和作用机制奠定了基础。

单核细胞增生李斯特菌,噬菌体裂解酶,基因表达,亲和层析

李斯特菌(Listeria)是一种分布广泛的胞内寄生革兰氏阳性短杆菌,共分7个种[1],包括单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)、伊氏李斯特菌(L.ivanoyii)、无害李斯特菌(L.innocua又名英洛克李斯特菌)、韦氏李斯特菌(L.welshmei)、西尔李斯特菌(L.seeligcri)、格氏李斯特菌(L.grayi)和莫氏李斯特菌(L.murrayi)[2]。李斯特菌属中以单核细胞增生李斯特菌致病性最强[3],该菌可导致人畜共患疾病,其致病剂量很低,在食品中存在100 cfu/g的该菌即可感染人类,并出现临床症状。……