高　斌,李　棒,李　娅,李　斌,刘成梅,付桂明,*

(1.南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;2.南昌大学,中德食品工程中心,江西南昌 330047;3.南昌大学食品学院,江西南昌330031)



米曲霉A-F04的β-果糖基转移酶基因的克隆鉴定及其生物信息学分析

高斌1,2,3,李棒3,李娅3,李斌1,2,3,刘成梅1,2,3,付桂明1,2,3,*

(1.南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;2.南昌大学,中德食品工程中心,江西南昌 330047;3.南昌大学食品学院,江西南昌330031)

以实验室前期筛选出的高产β-果糖基转移酶(β-fructosyltransferase,β-FTase)的米曲霉(Aspergillusoryzae)菌株A-F04出发,提取米曲霉A-F04基因组DNA和RNA,采用PCR和RT-PCR技术克隆β-FTase基因,得到β-FTase基因完整编码序列和内含子序列,利用重组技术构建β-果糖基转移酶质粒基因库,并构建基因的进化树,预测β-FTase分子量、等电点、氨基酸组成等物化性质,预测其N-糖基化位点和信号肽,运用SWISS-MODEL对β-FTase的三级结构预测。结果显示,成功鉴定出菌株A-F04具有β-FTase基因;菌株A-F04的β-FTase基因编码区长度为1630 bp,含有一个52 bp的内含子,位于173 bp与224 bp之间;编码序列的开放阅读框总长为1578 bp;软件分析得知β-FTase为亲水性的稳定蛋白,其分子量为57.4653 ku,理论等电点为4.83,由525个氨基酸组成;可能的N-糖基化位点有6处;信号肽分析软件得知其编码的1～17位置处的氨基酸为信号肽;SWISS-MODEL构建的3个模型质量较高,有利于后期对β-FTase的结构和功能的研究。

米曲霉A-F04,β-果糖基转移酶,基因鉴定,生物信息学分析

β-果糖基转移酶(β-fructosyltransferase,β-FTase,EC 2.4.1.9)能以蔗糖为反应底物,催化合成低聚果糖(fructooligosaccharides,FOS)[1-2]。FOS对改善肠道功能、防治便秘和腹泻、提高免疫力、促进矿物质吸收等具有特殊的生理功效,在食品、医药等领域应用市场巨大。……