肖其胜,杨捷琳,丁卓平,何宇平,*

(1.上海出入境检验检疫局,上海 200135;2.上海海洋大学食品学院,上海 201306)



五种DNA提取方法对酸奶及菌粉中益生菌DNA提取效果比较

肖其胜1,2,杨捷琳1,丁卓平2,*,何宇平1,*

(1.上海出入境检验检疫局,上海 200135;2.上海海洋大学食品学院,上海 201306)

针对酸奶及菌粉样品,比较多种样品前处理条件,包括取样量、菌粉溶剂及溶菌酶孵育时间等,最大程度去除样品中的脂肪、蛋白质及多糖,比较五种DNA提取试剂盒对益生菌DNA的提取效果。提取的DNA经NanoVue Plus测定浓度和纯度,PCR扩增综合评价提取效果。结果显示,酸奶取样量为100 mg时DNA浓度为49.00 ng/μL,A260/A280比值为1.8;采用纯牛奶溶解菌粉更为彻底,0.5 g/mL牛奶溶解菌粉后,提取DNA浓度可达到81.00 ng/μL;溶菌酶最佳孵育时间为1 h,增加孵育时间对细菌裂解没有明显帮助。同时,采用五种试剂盒所提取的DNA浓度均在20 ng/μL以上,A260/A280比值大于1.8或接近1.8,其中,Tiangen试剂盒提取的DNA浓度和纯度综合评价优于其他4种试剂盒。结果表明,实验建立的前处理方法能够有效的去除酸奶及菌粉中的脂肪、蛋白质及多糖,提高DNA提取的浓度及纯度;采用的五种商品化试剂盒均能用于酸奶和菌粉中益生菌DNA快速提取,在步骤、得率及纯度上各有差异,应按照不同的实验要求进行选择。

酸奶,乳酸菌菌粉,样品前处理,DNA提取,比较,PCR

益生菌是对人体肠道健康有益的一类微生物,大多属于乳酸菌属[1],广泛应用于酸奶、奶酪、膳食补充剂等食品及保健品生产。越来越多研究证实乳酸菌具有控制肠道感染,改善乳糖的利用率,降低血清胆固醇水平等功效[2-3]。……