谭才邓,朱美娟,廖延智,朱晓立

(广东轻工职业技术学院,广东广州 510300)



乙酸异戊酯高产菌株脂肪酶Lip2基因的克隆及表达研究

谭才邓,朱美娟,廖延智,朱晓立*

(广东轻工职业技术学院,广东广州 510300)

通过PCR扩增了乙酸异戊酯高产菌Loq-c的脂肪酶基因Lip2,其序列与Gene Bank中的Candida cylindracea Lip2 gene(序列号X64704.1)的序列相似度最高,为89%。构建原核表达载体pQE-lip2,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),获得了重组菌BL21(pQE-lip2)。经过表达条件探索,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,脂肪酶Lip2原核可溶表达最佳条件为:诱导温度30 ℃,IPTG使用浓度为1.5 mmol/L,150 r/min转速的条件下诱导表达5 h。

乙酸异戊酯,脂肪酶,克隆,表达

酯类化合物是发酵食品的重要香气成分之一,酵母菌是在发酵食品中合成酯类物质的重要微生物。酵母菌合成酯类化合物的途径主要有三个:酯化反应、醇解反应和脱氢反应[1]。酯化反应是合成酯类化合物的主要途径,其催化反应的酶类为脂肪酶,因此脂肪酶被广泛应用于食品加工及食品风味改良。此外脂肪酶在油脂工业、洗涤工业、化妆品工业及生物能源等方面应用广泛[1-5]。近年来,在医药工业中,脂肪酶因能被用于手性制备光学纯的药物而倍加瞩目[3]。

脂肪酶(EC 3.1.1.3)有多个同工酶,Longhi[6]等研究发现柱状假丝酵母(Candidacylindracea)有5个脂肪酶同工酶;Fickers[7]等研究解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)时,发现菌株E150能编码合成16个脂肪酶同工酶,而分泌到胞外的脂肪酶主要是Lip2,并且Lip2偏好催化合成短链酯类。

菌株Loq-c是本实验室分离获得的一株高产乙酸异戊酯的克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)。本实验参考前人的结果设计多个脂肪酶引物,通过PCR反应试探菌株Loq-c是否有脂肪酶,是否通过脂肪酶合成乙酸异戊酯,并将其克隆及进行原核表达研究,为生物高效合成乙酸异戊酯提供有价值的参考。……