郑华峰 陶晶 张斌 王纯 吴淳

基础研究

MiR-495通过下调PCNA抑制人血管内皮细胞增殖的作用研究

郑华峰 陶晶 张斌 王纯 吴淳

目的 探讨microRNA-495（miR-495）对人血管内皮细胞增殖的作用及其分子作用机制。方法 选择人脐静脉内皮细胞（HUVECs），利用lipofectamine2000转染试剂，将 miR-495 mimics（模拟物）或miR-495 inhibitors（抑制物）转染HUVECs，分别以mimics control和inhibitors control作为对照。通过MTT实验分析过表达或干扰miR-495对HUVECs细胞增殖的影响，进而通过生物信息学软件预测，双荧光素酶报告基因系统，荧光定量PCR及Western blot，预测并验证miR-495靶基因，最后通过功能互补实验，观察提高或敲低增殖细胞核抗原（PCNA）表达对HUVECs细胞增殖的影响。结果 体外细胞增殖实验发现，过表达miR-495可明显抑制HUVECs细胞的增殖，而干扰miR-495则可促进HUVECs细胞的增殖。PCNA是miR-495的靶基因，过表达miR-495可明显下调HUVECs细胞中PCNA mRNA及蛋白表达水平。功能互补实验显示，敲低PCNA的表达亦可降低HUVECs细胞的增殖，反之促进HUVECs细胞的增殖。结论 MiR-495可抑制HUVECs细胞的增殖,其作用机制主要通过下调PCNA的表达而实现。

MiR-495； 人脐静脉内皮细胞； 增殖； 增殖细胞核抗原

缺血性疾病引起的组织缺血和功能障碍与供血不足密切相关，缺血刺激下的自然修复过程常常不足以对抗血管狭窄或闭塞引起的组织血流灌注不足。临床治疗性血管形成主要应用于不适应手术治疗的冠心病、脑及外周血管疾病等缺血性疾病[1,2]。故此，探讨生理和病理状态下血管形成和消退规律及其分子机制，将为缺血性疾病的治疗提供新的实验支持[3]。血管内皮细胞（vascular endothelial cells）是血管内膜主要的构成细胞。研究……