杜凯丽 梁 钢 康继辉 米小芳 王宏坤 肖 虹 梁建芳 郑绘霞



RACK1对肺腺癌A549细胞生物学行为及相关蛋白表达的影响

杜凯丽 梁 钢 康继辉 米小芳 王宏坤 肖 虹 梁建芳 郑绘霞

【摘要】目的 研究RACK1基因沉默对A549细胞生物学行为的影响，探究其对VEGF、Bcl-2表达的影响。方法 转染RACK1 shRNA至A549细胞，分别设稳定转染的实验组、阴性对照组和空白对照组。Western blot检测各组细胞RACK1、VEGF、Bcl-2的表达，平板克隆实验检测各组细胞的增殖情况，划痕愈合实验观察细胞运动迁移的改变，流式细胞术分析细胞凋亡率的变化。结果 实验组细胞增殖能力下降，迁移能力减弱，凋亡率增高，VEGF、Bcl-2表达下调（P＜0．05）。结论 RACK1基因沉默能抑制A549细胞的增殖和迁移，诱导其凋亡，下调VEGF、Bcl-2的表达。

【关键词】RACK1；shRNA干扰；流式细胞术

Objective To investigate the effect of silencing RACK1 on A549 cell proliferation and VEGF，Bcl-2 expression． Methods The shRNA was transfected into A549 cells as the experiment group． The expression level of RACK1，VEGF，Bcl-2 were measured by western blot，cell proliferation was detected by plate colony forming assay． scratch healing experiment was used to detet migration capacity． Cell apoptosis was measured by flow cytometry． Results The ability of proliferation and the migration ability of the cells in the experimental group was weakened． The apoptotic rate was increased． The expression level of VEGF and Bcl-2 were decreased． Conclusion Targeting to inhibit RACK1 expression in A549 cells could inhibit proliferation and induce apoptosis，specifically decreased the expression level of VEGF and Bcl-2．

【Key words】 RACK1，ShRNA interference，Flow cytometry

肺腺癌发病隐匿，多数患者常以转移灶为首发症状，生存率极低［1］。RACK1在肺腺癌中表达增高，与患者的病理分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况有相关性［2］。本研究通过沉默肺腺癌A549细胞中RACK1的表达，观察干扰前后细胞的生长、迁移、细胞周期及凋亡状况，探讨RACK1在肺腺癌细胞中发挥的作用及其与VEGF和Bcl-2之间可能存在的关系。

1 实验方法

1.1 细胞的转染

待细胞达到60%～70%融合时，转染RACK1 shRNA至A549细胞，以转染空载质粒作为阴性对照组，以未转染的细胞作为空白对照组。

1.2 Western blot检测各组细胞RACK1、VEGF、Bcl-2的表达

取转染48 h后的各组细胞蛋白样品经1电泳分离后转膜，封闭后一抗、二抗4℃孵育，发光显影。目的蛋白与内参GAPDH灰度值标比后的比值为其相对蛋白表达量。

1.3 平板克隆形成实验

将各组细胞在6 cm培养皿中连续静置培养14 d。……