任丽伟，　魏　培，　杨晓菲，　杨　璐，　邓春艳，　齐　晖，　李富荣△

(1暨南大学第二临床医学院，深圳市人民医院干细胞与细胞治疗重点实验室，广东 深圳 518020； 2暨南大学医学院，广东 广州 510632)

小鼠iPSCs诱导分化为胰岛素分泌细胞及治疗糖尿病的实验研究*

任丽伟1, 2，魏培1，杨晓菲1, 2，杨璐1, 2，邓春艳1，齐晖1，李富荣1△

(1暨南大学第二临床医学院，深圳市人民医院干细胞与细胞治疗重点实验室，广东 深圳 518020；2暨南大学医学院，广东 广州 510632)

[摘要]目的： 利用3步法诱导方案，使小鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells，IPCs)，观察诱导效率和成熟度，并观察其对糖尿病小鼠治疗效果。方法: 本实验室通过piggyBac转座子将C57/C雄性小鼠来源胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts，MEFs)构建为小鼠iPSCs，利用3步法诱导方案分化为IPCs，观察细胞分化过程中的形态变化；RT-PCR和免疫荧光检测其胰岛β细胞发育相关基因和蛋白的表达；流式细胞术分析分化效率；葡萄糖刺激实验检测胰岛素和C肽分泌水平。将IPCs移植入C57/C雄性糖尿病小鼠模型左肾包膜下，监测血糖和血清中胰岛素含量28 d，观察逆转高糖血症的效果。结果: 建立的3步诱导方案可以将小鼠iPSCs诱导分化为IPCs，其表达胰岛β细胞的标志性基因(Pdx1、Ngn3、Pax6和Ins2)和蛋白(Pdx1、Nkx6.1和胰岛素)，在葡萄糖刺激下可分泌胰岛素和C肽。流式细胞术结果表明诱导分化的效率达28%。移植后3 d糖尿病小鼠血糖即降低至接近正常水平，血清胰岛素含量明显升高，对葡萄糖的调控能力明显增强。病理学观察IPCs细胞移植28 d后仍存活。结论: 建立的3步诱导法可将iPSCs高效定向诱导分化为IPCs，明显缩短了诱导分化的时间，移植至近交系同性别小鼠体内可逆转糖尿病的高糖血症。……