柴晓菲，孙亚冬，张　冰，刘　慧，于庆凯

(1.郑州大学附属肿瘤医院病理科，河南 郑州 450008；2.郑州大学附属肿瘤医院乳腺科，河南 郑州 450008)

浸润性导管癌原发灶CD3和CD20的表达与临床病理及预后指标的相关性分析

柴晓菲1，孙亚冬2，张冰1，刘慧1，于庆凯1

(1.郑州大学附属肿瘤医院病理科，河南 郑州 450008；2.郑州大学附属肿瘤医院乳腺科，河南 郑州 450008)

[摘要]目的研究CD3+和CD20+淋巴细胞在浸润性导管癌原发灶中的表达及其与预后的关系。方法入组100例乳腺癌患者石蜡包埋病理标本，采用免疫组化法检测浸润性导管癌原发灶中CD3+淋巴细胞、CD20+淋巴细胞与临床病理及预后的关系。结果100例乳腺癌患者原发灶中，CD3+ 96例(96.0%)，CD20+ 54例(54.0%)，原发灶CD3+淋巴细胞的百分率与临床分期、组织学分级及淋巴结转移状态有关(P<0.05)。结论乳腺癌原发灶有淋巴细胞浸润，CD3+与病变的严重程度密切相关。

[关键词]CD3；CD20；浸润性导管癌；免疫组织化学

在肿瘤免疫抑制机制中，肿瘤浸润淋巴细胞起到非常重要的作用,主要有T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞等，这些细胞在乳腺癌原发灶聚集，发挥抵抗肿瘤的作用，这些细胞与治疗效果和生存率相关[1]，T淋巴细胞主要参与细胞免疫，而B淋巴细胞主要参与体液免疫，两者共同参与抗肿瘤免疫应答过程。

1材料与方法

1.1材料收集选取郑州大学附属肿瘤医院病理科2012年1月至2014年1月80例浸润性导管癌石蜡包埋标本，术前均未接受放疗和化疗，术后病理结果均经我院2位以上病理科医生确认，且都有完整的临床病理资料。

1.2实验方法

1.2.1免疫组化选取病灶明显的组织，切4～5 μm的切片，烘烤，脱蜡，梯度酒精水化，修复，孵育灭活过氧化物酶等预处理后，加入一抗(CD3或CD20抗体)，4摄氏度孵育过夜，漂洗复温，加二抗37 ℃孵育30 min，PBS液漂洗、DAB显色、苏木素复染，PBS代替一抗作对照。

1.2.2结果判断方法400倍高倍镜下随机选取5个视野，CD3和CD20均为细胞膜着色。显色强度依次为：深棕色为3分，棕色为1分，黄色或浅棕色为1分，不显色为0分。显色面积依次为：>50%细胞为3分,25%～50%细胞为2分,<25%细胞为1分,<5%为0分。显色的强度与面积的乘积，<2定为阴性(-)，≥2定为阳性(+)[2]。

1.3统计学处理用SPSS 14.0处理相关数据，计数资料采用百分数表示，比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，检验水准α=0.05。

2结果

浸润性导管癌瘤内和瘤周存在CD3+和CD20+淋巴细胞，100例乳腺癌患者原发灶中CD3+96例(96.0%)，CD20+54例(54.0%)。CD3+淋巴细胞浸润与临床分期、组织学分级及淋巴结转移状态有关(P<0.05)。见表1。

3讨论

一旦发生肿瘤，机体很快产生针对肿瘤抗原的免疫应答反应，细胞免疫及体液免疫，细胞免疫占主导地位，少数情况下，细胞免疫起到协同作用。对黑色素瘤[3]、结直肠癌[4]、卵巢癌[5]等实体瘤的研究发现，原发灶中淋巴细胞的浸润往往提示预后较好。早在1992年，Aaltomaa等[6]报道乳腺癌原发灶中淋巴细胞的浸润提示较好的预后。目前，淋巴细胞在乳腺癌中的研究主要集中在三阴性乳腺癌及HER-2阳性乳腺癌中[7]。

本研究结果表明，100例乳腺癌患者原发灶中CD3+96例(96.0%)，CD20+54例(54.0%)，CD3+淋巴细胞浸润与临床分期、组织学分级及淋巴结转移状态有关(P<0.05)。初步表明T淋巴细胞在乳腺癌的发生发展过程中起到重要作用，而B淋巴细胞起到次要作用。这与国内张同先等[8]研究结果部分一致，但与国内蒋正华[9]研究结果相反，分析原因可能是样本量小、病例群体地区不同、结果判读重复性差等。

表1CD3和CD20在浸润性导管癌

原发灶中的表达及其与临床病理关系

项目nCD3-+PCD20-+P年龄/岁 <45222200.20910120.954 ≥45782763642肿瘤直径/cm <2461450.62226250.631 ≥2543512529临床分期 Ⅰ22319139 Ⅱ421410.02914280.086 Ⅲ360361917组织学分级 Ⅰ274231512 Ⅱ480480.00425230.622 Ⅲ25025169ER +752730.26032430.247 -252231411PR +624580.29425370.146 -380382117Her-2 +222200.20912100.363 -782763444淋巴结转移 是302280.00714160.930 否702683238

一直以来，乳腺癌患者的预后情况多与乳腺癌组织的病理分级、淋巴结转移状态、激素受体和细胞增殖指数Ki-67的表达水平有关。本研究涉及预后指标ER、PR、Her-2等，但与CD3和CD20表达并无相关性，有待于进一步随访深入了解其与预后的关系。

综上所述，乳腺癌原发灶大多有淋巴细胞浸润，CD3+与病变的严重程度相关。

参考文献：

[1]曹林林，刘颖男，郑德明，等．乳腺癌患者手术前后T淋巴细胞亚群变化的实验研究[J]．中国实验诊断学，2013，17(1)：113-114．

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[3]Clemente CG，Mihm MC Jr，Bufalinn R，et al．Prognostic value oftumor infiltrating lymphoeytes in the vertical growth phase ofprimary cutaneous melanoma[J]．Cancer，1996，77(7)：1303-1310．

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[6]Aahomaa S，Lipponen P，Eskelinen M，et al．Lymphocyte infiltrates as a prognostic variable in female breast cancer[J]．EurJ Cancer，1992，28A(4/5)：859-864．

[7]黄佳慧,陈小松，沈坤炜，等.肿瘤浸润淋巴细胞在乳腺癌中的研究进展[J].中国外科杂志,2015,53(9):714-717.

[8]张同先，张巍，刘芬，等.CD20+B和CD3+T淋巴细胞在乳腺浸润性导管癌和髓样癌中的表达及与预后的关系[J].肿瘤防治研究，2013.40(5):463-467.

[9]蒋正华，韩旭.肿瘤浸润T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达与预后的关系[J].中国现代医生，2015，53(6):12-16.

CD3 and CD20 Expressions of Original Site and the Correlation with Clinical Pathology and Prognosis Index in the Infiltrating Ductal Carcinoma

Chai Xiaofei1,Sun Yadong2,Zhang Bing1,Liu Hui1,Yu Qingkai1

(1.DepartmentofPathology,theCancerHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450008,China;2.DepartmentofBreastSurgery,theCancerHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450008,China)

[Abstract]ObjectiveTo research the CD3 and CD20 expressions and its relationship with prognosis in the primary infiltrating ductal carcinoma.MethodsThe 100 cases of breast carcinoma paraffin embedding pathologic specimens were collected,immunohistochemical detection was used to detect CD3+ lymphocytes,CD20+ lymphocytes in the primary infiltrating ductal carcinoma and the relationship with clinical pathology and prognosis.ResultsOf the 100 cases of breast carcinoma,CD3+ for 96 cases (96.0%),CD20+ 54 cases (54.0%),CD3+ lymphocyte infiltration was related with clinical stage,histological grade and lymph node status (P<0.05).Conclusionlymphocytes infiltration is mostly found in the breast carcinoma primary tumors,and CD3+ lymphocytes related to the degree of pathological changes.

[Key words]CD3; CD20; infiltrating ductal carcinoma; immunohistochemistry

作者简介：柴晓菲(1983-)，女，硕士，主治医师，主要从事肿瘤病理诊断工作。E-mail：chai1861@163.com 通信作者：于庆凯(1957-)，女，博士，主任医师，主要从事肿瘤病理诊断工作。E-mail：yuqingkai@hotmail.com

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2016.03.002

[中图分类号]R737.9；R730.23

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5412(2016)03-0191-03

(收稿日期：2015-12-13)