葛 怡

江苏省无锡市第二人民医院重症医学科, 江苏 无锡214000

阿魏酸钠对溃疡性结肠炎模型小鼠炎性因子及免疫功能的影响

葛 怡

江苏省无锡市第二人民医院重症医学科, 江苏 无锡214000

目的 探讨阿魏酸钠对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)模型小鼠炎性因子及免疫功能的影响。方法 选择32只实验小鼠，随机分为空白对照组、模型组、阿魏酸钠低剂量组、阿魏酸钠高剂量组,每组8只，模型组、阿魏酸钠组采用5%葡聚糖硫酸钠制作UC小鼠模型，建模成功后，阿魏酸钠低剂量组经胃管灌胃50 mg/kg阿魏酸钠，阿魏酸钠高剂量组灌灌胃10 mg/kg阿魏酸钠。比较4组血清炎性因子、免疫功能。结果 模型组血清白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)明显高于对照组，白介素4(IL-4)明显低于对照组(P<0.05)，阿魏酸钠干预组血清IL-1β、TNF-α明显低于模型组，IL-4明显高于模型组(P<0.05)，阿魏酸钠高剂量组血清IL-1β、TNF-α明显低于阿魏酸钠低剂量组，IL-4明显高于阿魏酸钠低剂量组(P<0.05)；模型组血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM明显高于对照组，补体C3明显低于对照组(P<0.05)；阿魏酸钠干预组血清IgA、IgG、IgM明显低于模型组，补体C3明显高于模型组(P<0.05)；阿魏酸钠高剂量组血清IgA、IgG、IgM明显低于阿魏酸钠低剂量组，补体C3明显高于阿魏酸钠低剂量组(P<0.05)。结论 阿魏酸钠可能通过降低炎性反应、调节体液免疫达到治疗UC的目的，且大剂量阿魏酸钠干预效果更好。

阿魏酸钠；溃疡性结肠炎；鼠；炎性因子；免疫功能

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)为临床常见的炎症性肠病，临床表现为持续或反复发作的腹痛、腹泻及黏液脓血便。而且UC不仅是一种慢性非特异性炎症性肠病，还具有明显的癌变倾向[1]，目前发病机制尚不明确，可能与感染、异常免疫反应、肠道黏膜屏障功能缺陷、肠道微生态失调及遗传因素等有关[2]。阿魏酸钠 (Sodium ferulate) 是一种新型非肽类内皮素受体拮抗剂，可清除自由基、抑制巨噬细胞活化和免疫过激反应[3]。本文通过建立动物模型的方法，探讨阿魏酸钠对UC小鼠炎性因子及免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用SPF 级Wistar 小鼠32只，6～8 周龄，体质量18～20 g，雌雄各半。小鼠由大学动物实验中心提供(许可证号150112)，SPF 级实验设施符合相关标准，小鼠每日按标准饲养，自由饮水及日常光照。本研究经医院动物伦理委员会批准。

1.2 仪器与试剂 全自动生化分析仪：日本日立7600型；酶标仪：美国BLRAD公司；高速冷冻离心机：天美科技有限公司CT14RD型；恒温箱：北京科伟实验设备有限公司303-2型；阿魏酸钠：重庆莱美药业股份有限公司，批准文号：国药准字H20056281，规格0.1 g；葡聚糖硫酸钠水溶液：Sigma公司；白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素4(IL-4)检测试剂购自深圳市达科为生物技术有限公司；免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、补体C3均购自四川迈克科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 动物分组：32只小鼠随机分为空白对照组、模型组、阿魏酸钠低剂量、阿魏酸钠高剂量组,每组8只。

1.3.2 造模方法：模型组、阿魏酸钠干预组给予5%葡聚糖硫酸钠水溶液作为饮用水，连续喂养6 d，每天进行大便隐血试验，小鼠出现腹泻、黏液脓血便则表明模型建立成功,建模过程中小鼠无死亡。

1.3.3 药物干预：建模成功后，阿魏酸钠低剂量组给予50 mg/kg阿魏酸钠溶液灌胃，阿魏酸钠高剂量组给予100 mg/kg阿魏酸钠溶液灌胃，空白对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃，均为1次/d，连续干预7 d，给药期间正常饮食。

1.4 观察指标 干预7 d后，禁食24 h后，2%戊巴比妥钠麻醉，采集主动脉血2 ml后处死。血液静置10～20 min，3 000 r/min离心10 min取上清液。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检炎性因子：IL-1β、TNF-α和IL-4，采用免疫比浊法检测血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、补体C3 免疫功能指标。

2 结果

2.1 炎性因子检测结果 模型组血清IL-1β、TNF-α明显高于对照组，IL-4明显低于对照组(P<0.05)；阿魏酸钠干预组血清IL-1β、TNF-α明显低于模型组，IL-4明显高于模型组(P<0.05)；阿魏酸钠高剂量组血清IL-1β、TNF-α明显低于阿魏酸钠低剂量组，IL-4明显高于阿魏酸钠低剂量组(P<0.05, 见表1)。

组别只数IL⁃1β(pg/ml)TNF⁃α(pg/ml)IL⁃4(pg/ml)对照组851．81±3．4246．48±10．95151．20±6．52模型组863．54±11．97①80．34±13．68①114．36±12．07① 低剂量组855．63±4．89②66．92±11．72②126．59±5．64② 高剂量组851．02±3．69②③56．56±6．89②③134．48±7．36②③

注：与对照组比较，t=2.665～3.102, ①P<0.05；与模型组比较，t=2.107～4.391, ②P<0.05；与阿魏酸钠低剂量组比较，t=2.128～2.407, ③P<0.05。

2.2 免疫功能 模型组血清IgA、IgG、IgM明显高于对照组，补体C3明显低于对照组(P<0.05)；阿魏酸钠干预组血清IgA、IgG、IgM明显低于模型组，补体C3明显高于模型组(P<0.05)；阿魏酸钠高剂量组血清IgA、IgG、IgM明显低于阿魏酸钠低剂量组，补体C3明显高于阿魏酸钠低剂量组(P<0.05, 见表2)。

组别只数IgA(g/L)IgG(g/L)IgM(g/L)补体C3(g/L)对照组80．035±0．0220．125±0．0240．224±0．0230．185±0．012模型组80．135±0．032①0．468±0．051①0．586±0．121①0．105±0．022①低剂量组80．072±0．028②0．312±0．041②0．325±0．026②0．138±0．015②高剂量组80．045±0．025②③0．184±0．023②③0．265±0．018②③0．164±0．021②③

注：与对照组比较，t=7.284～10.570, ①P<0.05；与模型组比较，t=4.191～14.358, ②P<0.05；与阿魏酸钠低剂量组比较，t=2.304～7.701, ③P<0.05。

3 讨论

目前较公认的观点是UC发病与抗炎因子与抑制因子失衡、免疫系统异常密切相关[4]。IL-1β和TNF-α是重要的促炎因子，IL-1β有多种生物学效应，能上调免疫，促进白细胞黏附分子和TNF-α的表达和产生，二者协同作用引起肠道炎症反应[5]。

IL-4和IL-1β在维持肠道免疫平衡中起着关键作用。正常状态下，人体肠黏膜能自发地分泌IL-4等抗炎因子来维持肠道的免疫功能[6]。当发生UC后，IL-1β可反馈性地促进T淋巴细胞的表达，影响机体的免疫功能，导致Th1/Th2亚群失衡[7]。王雪茜等[8]研究发现，在UC患者中，IL-4基因表达显著减少。若IL-4和IL-1β的平衡遭到破坏，IL-1β等促炎因子水平升高，IL-4等抗炎因子水平下降，导致肠黏膜炎症的发生[9]。本研究中，UC模血清IL-1β、TNF-α显著升高，IL-4显著下降，与上述结论基本一致。阿魏酸钠可拮抗内皮素引起的血管收缩，改善肠道血管通透性，有效改善腹泻、便血症状；且钠自身存在良好的抗炎作用，能调控相关下游炎症因子所形成的负反馈通路，减少及抑制巨噬细胞活化及中性粒细胞的渗出，进一步缓解肠道炎症反应[10]。本研究中，阿魏酸钠干预组血清IL-1β、TNF-α明显于模型组，IL-4明显高于模型组，姚君等[11]也有类似的文献报道。且阿魏酸钠高剂量组与低剂量组比较差异有统计学意义，提示大剂量的阿魏酸钠更有利于降低UC炎性因子表达。

免疫功能异常是UC发生、发展的重要因素之一，体液免疫与UC发生相关[12]。体液免疫是通过免疫球蛋白和补体来实现的，相关研究表明，UC患者血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM均异常升高，补体C3明显降低，表现为明显的免疫功能亢进[13]，本实验也支持这一观点。阿魏酸钠可拮抗内皮素引起的血管收缩，清除炎症反应引起的自由基增多,改善肠道局部炎症，调节肠道免疫功能，并能抑制免疫过激，降低UC疾病活动指数[14]，还对全身免疫紊乱起到较好的调节作用，有利于促进疾病本身及整体功能的恢复。本研究中，阿魏酸钠干预组血清IgA、IgG、IgM均明显低于模型，补体3明显高于模型组，且阿魏酸钠大剂量组干预效果更好。

本研究结果表明，阿魏酸钠可能通过降低炎性反应、调节体液免疫达到治疗UC的目的，且呈现出明显的量效关系。本文研究的局限性在于未对疾病活动指数、细胞免疫等进行比较，且缺乏对阿魏酸钠可能作用机制的深入分析，有待于今后作进一步的研究。

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The effect of inflammatory cytokines and immune function of sodium ferulate for ulcerative colitis model mice

GE Yi

Department of Severe Medicine, the Second People’s Hospital of Wuxi, Wuxi 214000, China

Objective To investigate the effect of inflammatory cytokines and immune function of sodium ferulate for ulcerative colitis (UC) model mice.Methods Thirty-two mice were divided into control group, model group,sodium ferulate low-dose group, sodium ferulate high dose group. Model group, the sodium ferulate group used 5% dextran sodium sulfate production UC model in mice, modeling after 7 days, sodium ferulate low-dose group given 50 mg/kg sodium ferulate gavage, sodium ferulate high dose group given 100 mg/kg sodium ferulate gavage.Then serum inflammatory cytokines, immune function were compared among 4 groups.Results The serum IL-1β, TNF-α in the model group were significantly higher than those in the control group, IL-4 was significantly lower than that in the control group (P<0.05)， sodium ferulat intervention group. The serum IL-1β, TNF-α in were significantly lower than those in model group, IL-4 was significantly higher than model group (P<0.05), serum IL-1β, TNF-α in sodium ferulate high dose group were significantly lower than those in sodium ferulate low-dose group, IL-4 was significantly higher than that in sodium ferulate low-dose group (P<0.05). The serum IgA, IgG, IgM in model group were significantly higher than those in the control group, C3 was significantly lower than that in control group (P<0.05).The serum IgA, IgG, IgM in sodium ferulat intervention group were significantly lower than those in model group, C3 was significantly higher than that in model group (P<0.05), The serum IgA, IgG, IgM sodium ferulate high dose group were significantly lower than those in sodium ferulate low-dose group, C3 was significantly higher than that in sodium ferulate low-dose group (P<0.05).Conclusion Sodium ferulate may adjust the humoral immune by reducing inflammatory reaction, to achieve the purpose of the treatment of UC, and high-dose sodium ferulate intervention effect is better.

Sodium ferulate; Ulcerative colitis; Mice; Inflammatory cytokines; Immune function

葛怡，主治医师,研究方向：重症医学。E-mail:cm0771@126.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.10.012

R574.62

A

1006-5709(2016)10-1124-03

2016-05-27