姜蕾

(濮阳市油田总医院　河南 濮阳　457001)



手足口病不同标本类型病原检出率对比分析

姜蕾

(濮阳市油田总医院河南 濮阳457001)

【摘要】目的对比分析手足口病患儿咽拭子和肛周拭子标本的病原检出率。方法采用实时荧光定量PCR技术对310例手足口病患儿的咽拭子和肛周拭子标本进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)、肠道通用型病毒检测。结果310例患儿的咽拭子、肛周拭子标本中，肠道通用型病毒阳性率分别为73.87%、89.68%，EV71阳性率分别为14.52%、20.00%，CoxA16阳性率分别为6.45%、9.35%。两种类型标本中肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型、柯萨奇病毒CoxA16型阳性检出率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论手足口病患儿肛周拭子病原标本检出率高，提倡及时优先采集肛周拭子标本。

【关键词】手足口病；肠道病毒；检出率

手足口病是一种儿童常见传染病，可由多种肠道病毒引起，其中EV71易引起神经系统疾病，导致病情加重甚至死亡。目前，监测手足口病原体的方法主要为实时荧光定量PCR技术。本实验对手足口病患者的咽拭子、肛周拭子标本分别进行检测，通过监测EV71，CoxA16和肠道病毒通用型，筛选最有效的标本类型，为手足口病临床诊断提供有效的实验室依据。

1材料和方法

1.1标本来源选取2015年1月1日至2015年7月1日濮阳市油田总医院收治的310例手足口病患儿，其中男230例，女80例，年龄0～5岁。采集咽拭子310份、肛周拭子310份，所有标本采集时间均控制在发病3 d内，并在抗病毒治疗前。手足口诊断标准参考《手足口病防控指南(2010年版)》。

1.2检测方法

1.2.1仪器和试剂美国ABI 7300型实时荧光定量PCR仪。肠道病毒71型(EV71)核酸检测试剂盒、CoxA16核酸检测试剂盒、肠道病毒通用型核酸检测试剂盒均购于湖南圣湘生物技术有限公司。

1.2.2标本采集采集患者发病3 d内咽拭子和肛周拭子样本，用专用采样棉签采集后，迅速将棉签放入装有3～5 ml生理盐水的15 ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，-20 ℃以下低温冷冻保存。

1.2.3病毒核酸提取取1.5 ml灭菌离心管，每管加入600 μl RNA提取溶液1-mix，加入200 μl待测样本或阴性对照、阳性对照，盖上管盖，震荡混匀10 s，瞬时离心。每管加入100 μl RNA提取溶液2(充分混匀后吸取)，震荡混匀10 s后置于60 ℃ 10 min，再置于4 ℃ 10 min。瞬时离心后将离心管置于分离器上，3 min后缓慢将溶液吸出，每管加入600 μl RNA提取溶液3和200 μl提取溶液4，震荡混匀5 s，瞬时离心后将离心管再次置于分离器上。3 min后将管底残余液体完全吸出丢弃，离心管置于新的1.5 ml离心管上，加入30 μl洗脱液洗脱RNA。

1.2.4RT-PCR反应吸取已处理的样本RNA，阴性对照、阳性对照各5 μl加入45 μl PCR-mix中，盖好管盖，上机进行PCR扩增实验。

1.2.5结果判读对于Ct<35的样本，报告为病毒检测阳性。

1.3数据处理采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析。定性资料采取率表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同类型标本肠道病毒阳性率比较310份咽拭子标本中，肠道病毒阳性229例，阳性率为73.87%；肛周拭子标本中，肠道病毒阳性278例，阳性率为89.68%。肛周拭子标本阳性检出率高于咽拭子标本，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2不同类型标本的不同肠道病毒阳性率比较310例患儿的咽拭子、肛周拭子标本中，肠道通用型病毒阳性率分别为73.87%(229/310)、89.68%(278/310)，EV71阳性率分别为14.52%(45/310)、20.00%(62/310)，CoxA16阳性率分别为6.45%(20/310)、9.35%(29/310)。两种类型标本中肠道病毒通用型、EV71、CoxA16阳性检出率差异均有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

手足口病是由多种肠道病毒引起的常见传染病之一，近年来在5岁以下儿童中流行，表现为发热和手、足、口腔等皮疹、溃疡，个别引起心肌炎、神经系统疾病等并发症[1]。近年来，我国发生了多次以EV71型为主的手足口病爆发和流行。肠道病毒的常规病原学检测是病毒分离培养后进行血清学中和实验定型，尽管中和试验对确定肠道病毒的血清型比较特异且可靠，但是这种方法费时耗力、灵敏度不高，目前实时荧光定量PCR技术为快速诊断肠道病毒的重要手段。本研究采用实时荧光定量RT-PCR检测技术发现，肛周拭子标本阳性检出率高于咽拭子标本，咽拭子标本中阳性率为73.87%；肛周拭子标本中阳性率为89.68%。

本实验咽拭子、肛周拭子标本中，肠道通用型病毒阳性率分别为73.87%、89.68%，EV71阳性率分别为14.52%、20.00%，CoxA16阳性率分别为6.45%、9.35%。两种标本中肠道病毒通用型、EV71、CoxA16阳性检出率差异均有统计学意义(P<0.05)，显示肛周拭子比咽拭子更敏感，检出率更高。这与廖英等[2]报道一致。然而，李亮等[3]研究认为咽拭子的肠道病毒通用型和EV71阳性检出率最高，肛周拭子的CoxA16阳性检出率最高。综上所述，在今后的手足口病防治工作中，为了提高检出率，提倡及时优先采集肛周拭子标本。

参考文献

[1]吴亦栋,尚世强,陈志敏,等.手足口病病原体流行特征分析及临床意义[J].中华儿科杂志,2010,48(7):535-539.

[2]廖英,谢鸿恩.手足口病病原学检测及临床特点相关性研究[J].吉林医学,2010,31(24):4075-4076.

[3]李亮,汪华,史智扬,等.江苏省手足口病病原阳性检出率相关因素及病原学特征[J].南京医科大学学报:自然科学版,2010,(1):128-133.

(收稿日期：2015-12-17)

【中图分类号】R 446.5

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.03.052