陈文拴，黄乾明，*，陈华萍，杨泽身，王安逸，苏光灿

（1.四川农业大学理学院，四川 雅安 625014；2.凉山州中泽新技术开发有限责任公司，四川 西昌 615000）

油橄榄查尔酮合酶与查尔酮异构酶基因全长的克隆及序列分析

陈文拴1，黄乾明1，*，陈华萍1，杨泽身2，王安逸2，苏光灿2

（1.四川农业大学理学院，四川 雅安 625014；2.凉山州中泽新技术开发有限责任公司，四川 西昌 615000）

查尔酮合酶（chalcone synthase，Chs）与查尔酮异构酶（chalcone isomerase，Chi）是植物类黄酮合成代谢途径中的两个关键酶。采用同源克隆、反转 录聚合酶链式反 应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）、融合引物嵌套PCR（fusion primer and nested integrated PCR，FPNI-PCR）与3’-cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA end，RACE）相结合，分别 克隆出油橄榄chs与chi基因全长。序列分析表明，油橄榄chs基因全长DNA（GenBank登录号：KF935223.1）和cDNA（GenBank登录号：KF935224.1）序列分别为2 085 bp和1 173 bp，该基因的开放阅读框（open read ing frame，ORF）编码390 个氨基酸，其氨基酸序列与葡萄和番茄全长Chs氨基酸序列的相似度在90%左右。生物信息学分析表明，该基因编码的蛋白属于Chs蛋白家族。油橄榄chi基因全长DNA（GenBank登录号：KF886190）和cDNA（GenBank登录号：KF886191）序列分别为1 373 bp和750 bp，其ORF编码249 个氨基酸，该氨基酸序列与已报道的其他植物Chi氨基酸序列的相似度最高在65%左右，序列中包含一段由198 个氨基酸残基组成的具有分子内裂解酶活性的功能域，符合 Chi蛋白家族特征。

油橄榄；查尔酮合酶；查尔酮异构酶；基因克隆；序列分析

油橄榄（Olea europaea）属于木犀科，木樨榄属，常绿阔叶乔木，其果实主要用来压榨生产有“液体黄金”之称的橄榄油[1-2]。在油橄榄中除脂肪酸外关注较多的是具有抗氧化活性的物质，其中以黄酮类化合物最具代表性[3-4]。研究发现，黄酮……