闫锦锦 闫东明 邹雪 刘丹 彭超 苏亚南

（芜湖康卫生物科技有限公司，芜湖 241000）

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的克隆表达及纯化

闫锦锦 闫东明 邹雪 刘丹 彭超 苏亚南

（芜湖康卫生物科技有限公司，芜湖 241000）

为获得高纯度具有生物活性的尿素酶B亚单位（UreB）蛋白，利用PCR方法扩增出ureB目的基因，将其插入到pET28a载体中，构建表达质粒pET28a-ureB。将鉴定正确的质粒转入大肠杆菌中培养，通过IPTG诱导表达获得UreB蛋白。采用Q Sepharose High Performance阴离子交换层析纯化，G-25凝胶过滤层析脱盐，并通过SDS-PAGE和免疫双扩散法对UreB蛋白进行鉴定。结果表明，该蛋白相对分子质量约为64 kD，与预期结果相符，脱盐后获得的UreB蛋白纯度为98.5%；免疫双扩散法证明该蛋白具有良好的生物活性和反应特异性。最终确定的纯化工艺，达到了一步纯化即得到高纯度、具有生物活性蛋白的目的，该纯化工艺简单、有效。

幽门螺杆菌；尿素酶B亚单位；UreB蛋白；蛋白纯化

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H. pylori）被公认是消化性溃疡、慢性活动性胃炎、胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的主要致病因素，与胃癌的发生存在密切关联性［1-3］，已被世界卫生组织定为Ⅰ类致癌因子［4］。H. pylori感染呈现全球分布特点，据有关报道显示，世界人口平均感染率已超过50%，发展中国家的H. pylori感染率更高，我国的感染率达到61%［5］。目前对于抗H. pylori感染方法主要采用的是药物治疗法，但都存在一定的局限性［6］，因此开发抗H. pylori感染疫苗产品成为研究热点。

尿素酶B亚单位（UreB）作为疫苗的有效抗原蛋白，具有无毒、免疫效果好等特点，已被相关实验所证实［7-9］。……