冯梦蝶毛普加洪愉许泽仰赵继华杨洪文宋武战黄芬井申荣曾韦锟，3

（1.昆明理工大学医学院，昆明 650500；2.成都军区昆明总医院核医学科，昆明 650032；3.昆明学院 医学院临床检验教研室，昆明 650214）

LSPA1早期基因gp22细菌双杂交诱饵载体与筛选文库的建立

冯梦蝶1毛普加1洪愉2许泽仰1赵继华2杨洪文2宋武战2黄芬1井申荣1曾韦锟1，3

（1.昆明理工大学医学院，昆明 650500；2.成都军区昆明总医院核医学科，昆明 650032；3.昆明学院 医学院临床检验教研室，昆明 650214）

构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pKT25-gp22和甲型副伤寒沙门氏菌基因文库以便后续的筛选实验。PCR扩增获得gp22基因，插入pKT25构成诱饵质粒pKT25-gp22。提取甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA，经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pUT18C质粒的BamHⅠ位点，获得基因组DNA表达文库。用化转的方法将诱饵质粒与pUT18C共转入BTH101，检测诱饵质粒自激活作用，并检测诱饵蛋白对宿主菌的毒性。将文库质粒电转至JM109感受态，PCR鉴定文库的多样性。诱饵载体pKT25-gp22无自激活报告基因的能力且对细菌的生长无毒性。所构建的副甲基因组文库覆盖基因组达8倍，满足文库筛选需要。成功构建细菌双杂交系统中诱饵载体pKT25-gp22，筛选文库质量良好，可应用于细菌双杂交实验。

细菌双杂交；诱饵载体；基因组文库；早期基因；甲型副伤寒沙门氏菌

甲型副伤寒沙门菌（副甲）是人兽共患病甲型副伤寒的致病菌。全球每年约有2 165万人感染伤寒或副伤寒菌，造成21.5万人死亡，其中每4例中就有1例是由甲型副伤寒沙门菌引起的［1］。在医疗环境恶劣、食品和水不安全的东南亚和中南亚，尤其在儿童和青少年人群中，副伤寒仍然是引起疾病和死亡的重要原因［2］。……