张亮花尔并王华明

（1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457；2.中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308）

粉红黏帚霉糖化酶基因的克隆、表达及酶学性质分析

张亮1，2花尔并1王华明2

（1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457；2.中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308）

用黑曲霉（Aspergillusniger）G1为宿主菌表达粉红黏帚霉（Gliocladiumroseum）糖化酶。运用PCR技术从粉红粘帚霉中扩增得到一个疑似糖化酶基因序列（约1.8 kb），并将其连接到载体pGm上组建成重组质粒pGm-3440。将重组质粒转化到黑曲霉G1菌株中，经amdS筛选及PCR验证获得表达糖化酶的黑曲霉重组工程菌。重组菌的发酵结果显示，糖化酶基因在黑曲霉中得到了分泌表达，用国标法（QB/T 1803-1993）测得重组糖化酶活性达292 U/mL。进一步对其酶学性质进行分析发现，该重组酶最适温度和pH分别为50℃和5.0，该酶的耐热性较差，pH稳定性较好。

糖化酶；粉红黏帚霉；黑曲霉G1；分泌表达

糖化酶，又称葡萄糖淀粉酶［Glucoamylase，系统命名为淀粉 α-1，4-葡聚糖葡萄糖水解酶，α-1，4-Glucanglucohydrolase（EC.3.2.1.3）］，是一种具有外切活性的酶，它能把淀粉、糊精、糖原等从非还原性末端水解α-1，4-葡萄糖苷键，而得到终产物β-D-葡萄糖，也能缓慢水解α-1，6-葡萄糖苷键或α-1，3-葡萄糖苷键，转化为葡萄糖［1-3］。糖化酶在工业上具有重要的用途，例如，低热量啤酒的酿造，酒精工业中谷物的水解，淀粉糖工业中生产葡萄糖、高葡萄糖糖浆，农用化学品及药物合成等［4-6］。糖化酶来源广泛，已报道的产糖化酶真菌有23个属，35个种，细菌有3属3种［7］。由于黑曲霉能几乎100%水解淀粉产生葡萄糖，其产生的糖化酶转苷酶活性较低［8］。……