陈春琳刘祥王成祥张晓娟俱雄张涛吴三桥

（1.陕西理工学院生物科学与工程学院，汉中 723001；2. 安徽省肥西县特殊教育学校，合肥 231200）

铜绿假单胞菌外膜蛋白I的原核表达、纯化及免疫保护作用研究

陈春琳1刘祥1王成祥2张晓娟1俱雄1张涛1吴三桥1

（1.陕西理工学院生物科学与工程学院，汉中 723001；2. 安徽省肥西县特殊教育学校，合肥 231200）

铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI具有较强的免疫原性，在疫苗上具有开发前景。利用分子方法获得OprI蛋白的表达菌株。Western blotting 验证表明抗体能与OprI蛋白特异性结合。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得OprI蛋白。将OprI蛋白免疫小鼠并攻毒铜绿假单胞菌，发现OprI蛋白激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到57.14%，与对照组相比较达到显著性。采用正交试验设计，获得OprI菌株最佳诱导表达条件为：加IPTG菌夜OD600值0.8，加IPTG终浓度 0.3 mmol/L，诱导时间 8 h，诱导温度 28℃；菌株最佳培养条件为转速230 r/min，葡萄糖浓度0%，装液量50 mL。

铜绿假单胞菌；OprI蛋白；免疫保护；正交试验；诱导条件

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），又名绿脓杆菌，是医院感染最常见的条件致病菌之一，常分布于人与动物皮肤和肠道上；在机体烧伤、免疫力下降、重大疾病创伤后，容易诱发感染，甚至导致感染性休克［1，2］。由于抗生素的大量使用，铜绿假单胞菌出现不同程度的耐药性，增加了治疗的难度，人们一直在寻找一种不产生耐药性的防治药物［3，4］。

铜绿假单胞菌主要的免疫保护抗原有OprI，OprF和OprH。OprI为铜绿假单胞菌主要的外膜蛋白之一，可激活机体非特异性免疫，并与抗原递呈细胞（Antigen-presenting cells，APC）相互作用，提高与其融合的蛋白的保护率［5，6］。……