白艳丽

沈阳市第一人民医院检验科,辽宁沈阳 110041

世界卫生组织统计，我国已经成为乙型肝炎的高流行区，接近10%的人群携带率已经成为严重的公共社会问题[1]。针对乙型肝炎的测定，目前临床上方法较多，如酶联免疫吸附法（ELISA）、胶体金免疫法、微粒子酶联免疫法（MEIA）以及时间分辨荧光分析法等（TRFIA）等[2]。目前我国针对乙型肝炎血清标志物的测定大多使用酶联免疫吸附法，此种方法虽能对乙肝血清学病毒标志物进行定性分析，但其敏感度较差，且针对前带现象不能较好的分析，容易导致钩状效应的发生[3]，同时在标本保持、运送以及检测过程中容易受到交叉污染而影响检查结果[4]。关键是该方法不能有效的对乙肝病毒标志物行动态分析，而对于较低水平乙肝病毒感染后的标志物亦存在漏检可能[5]。故本研究主要探讨MEIA在乙肝五项测定中的应用价值，并与常规ELISA进行比较，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年1月～2014年6月确诊乙型病毒性肝炎在我院复查进行乙肝两对半测定复查患者200例，按照随机数字法分为两组，各100例，其中观察组：男56例，女44例，年龄18～50岁，平均（32.1±5.6）岁，病程1～ 20年，平均（5.5±0.6）年；对照组：男55例，女45例，年龄18～51岁，平均（32.3±5.4）岁，病程 1～ 20年，平均（5.4±0.6）年，两组性别、年龄及病程等差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器与方法

1.2.1 仪器与试剂 酶标仪使用BIOTEXELX-800型，洗板机使用anthosfluid型；化学发光全自动化分析仪使用美国AXSYMABBoTT型；ELISA法使用乙肝两对半试剂盒由厦门新创公司提供（10910148）。EIA法使用美国AXSYM原装配套试剂。

1.2.2 EIA法原理及操作步骤 将包被抗体置入塑料微珠试剂内，加入标本液，37℃温箱培育并加入碱性磷酸酶标记抗体，之后将其转移至玻璃纤维柱内，洗涤，洗脱后，加入荧光底物—4-甲基伞型酮磷酸盐，365nm偏光照射产生荧光，采用速率法检测荧光强度，并通过处理软件转换计量资料。其中HBsAg、HBsAb和HBeAg测定分别采用双抗夹心法，并以样本荧光速率值与cut-off荧光速率比值转换值表示，而HBcAb与HBeAb测定则使用竞争法，以样本荧光速率值转换值表示，单位均为mIU/mL。

1.2.3 ELISA法 所有操作均严格说明书进行，采用试剂盒所示阴性对照为吸光度值（A），将其2.1倍设定为临界值（CO），提高样品吸光度值与临界值比值，判断阴性与阳性结果。

1.2.4 研究方法 所有患者入组后均签署知情同意书，并申报医院伦理委员会批准，其中观察组采用MEIA法测定，对照组则使用ELISA法测定，比较两组患者测定阳性率，并统计两组操作时间，得出结果时间。

1.3 统计学处理

应用SPSS13.0进行,计量资料以（x±s）表示 ,两组间均数的比较使用t检验，组间率的比较采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组测定阳性率比较

观察组测定HBsAg、HBcAb和HBeAb的阳性率显著高于对照组（P＜0.05）,两组测定HBsAb和HBeAg的比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组测定阳性率比较[n（%）]

2.2 两组操作时间，得出结果时间比较

观察组操作时间和得出结果时间均显著短于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 两组操作时间得出结果时间比较（± s，min）

表2 两组操作时间得出结果时间比较（± s，min）

组别 操作时间 得出结果时间观察组 6.5±3.2 60.5±2.8对照组 8.9±3.6 120.5±10.5 t 4.983 55.213 P 0.000 0.000

3 讨论

ELISA法作为目前临床最常用的一种测定HBV血清标志物的方法，已经得到临床广泛应用，但因生产该试剂尤其是包被基因片段的厂家不一[6]，各有差异，同时其无统一操作流程可循，加之该方法不容忽视的漏诊率以及操作繁琐性、无法避免的污染因素等而限制其临床应用。同时传统的ELISA法测定乙型肝炎血清病毒标志物仅能达到定性目的，即可对阴性与阳性结果做出判断，但未能实现患者体内乙型肝炎病毒标志物血清浓度，对临床治疗的指导意义有限[7]。MEIA法其临床检测时间显著缩短，并且能针对单个标准进行测定，操作系统封闭性强，有效减少了操作过程中引起的交叉污染[8]。

本研究观察组测定HBsAg、HBcAb和HBeAb的阳性率显著高于对照组。观察组采用的MEIA法，作为一种定量测定方法，其能较为准确的反映患者血清内病毒标志物的水平，从而间接的反映机体乙肝病毒DNA复制情况及活跃度，更好的指导临床治疗[9]。其主要通过过氧化物酶标记抗原为底物，采用塑料小孔管载体，通过鲁米诺为发光剂联合发光增强剂增敏和稳定作用的一种化学发光酶联免疫法[10]。其作为发光酶联免疫技术，具有极强的生物素亲力以及通过强化发光技术而提高临床测定阳性率[11]，而且所使用的固相载体，其颗粒小，表面积大，分布广泛，有效的增加了反应面积[12]，故本研究对照组的阳性诊断率升高。同时本组临床测定时间显著短于对照组，可以进行独立标本测定，其原因可能与MEIA法所用仪器自动化程度较高，提取后可将检测自动完成有关，故MEIA法从而更好的提高了临床实用性。MEIA法已经成为目前临床测定乙肝病毒标志物的“金指标”，但其价格昂贵，尤其是针对经济条件较差地区以及基层医院，不易普及。故通过本组研究建议，MEIA法测定乙肝两对半能在定量指标上诊断，其诊断率高，建议在经济条件允许前提下，推广使用。

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