单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠TGF-β1、PC-III影响的实验研究*

2015-04-06明海霞

中医研究 2015年10期

关键词：中医学院洗液胞外基质

李杨，明海霞

(甘肃中医学院，甘肃兰州 730000)

单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠TGF-β1、PC-III影响的实验研究*

李杨，明海霞

(甘肃中医学院，甘肃兰州 730000)

目的：观察单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、III型前胶原(PC-III)含量的影响。方法：将40只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、辽细辛组、单叶细辛组。后3组用中医理论复制寒饮射肺动物模型；造模后第2天，正常对照组、模型对照组分别给予生理盐水(1μL/g)灌胃，两细辛治疗组灌胃中药水提取液(1 μL/g)，1 d 1次，连续28 d。检测肺泡灌洗液、血清中TGF-β1、PC-III含量。结果：与正常对照组对比，模型对照组TGF-β1、PC-III含量升高，差别有统计学意义(P<0.05)，说明造模成功；与模型对照组对比，给药组TGF-β1、PC-III含量均明显降低，差别有统计学意义(P<0.05)；两细辛给药组的TGF-β1、PC-III对比，差别无统计学意义(P>0.05)。结论：单叶细辛可调节TGF-β1、PC-III的表达，减轻肺部炎症，对寒饮射肺模型大鼠肺组织具有保护作用。

细辛/药效学；寒饮射肺证/药物作用；TGF-β1；PC-III；动物；大鼠

寒饮射肺证为临床常见慢性呼吸系统病证，多由宿罹痰饮、复感寒邪、寒邪引动痰饮而出现咳嗽、哮喘、水肿等病症，病情呈进行性、缓慢进展，常并发慢性支气管炎、肺动脉高压，严重者常发生肺源性心脏病等[1]。已有文献[2]报道，单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠血栓素-B2、内皮素、磷脂等有显著的疗效，但对TGF-β1、PC-III的研究未见相关报道。本实验根据中医理论复制寒饮射肺证动物模型，就单叶细辛对寒饮射肺证动物模型TGF-β1、PC-III含量的表达进行了研究。

1 材料与方法

1.1 动物

SPF级7～8周龄Wistar 大鼠40只，体质量(200±20)g，雌雄兼用，购自甘肃中医学院SPF级科研实验动物中心，实验动物质量合格证号：SCXK(甘) 2013-0004。

1.2 药品、试剂与仪器

辽细辛、单叶细辛由甘肃中医学院附属医院中草药房提供，经甘肃中医学院中药教研室黄世佐教授鉴定，甘肃中医学院中药化学教研室用水提法模拟临床用药剂型，制备成质量分数1 g/mL的溶液备用。血PC-III放免试剂盒(批号131502)、TGF-β1酶联免疫试剂盒(批号131015)、肺泡灌洗液PC-III放免试剂盒(批号131505)、TGF-β1酶联免疫试剂盒(批号131106)，均由北京福瑞生物工程公司提供；质量分数250 g/L的乌拉坦，为中国医药集团上海化学试剂公司产品，批号 C20130305。BioLap420E生物信号监测系统，成都泰盟生物科技公司产品；放射免疫γ自动记数器，南京桑力电子设备厂产品；JA1003型电子天平，上海天美仪器厂产品；超速离心机，金坛市恒丰仪器厂产品；Bio-RAD680 酶标仪电脑分析系统，产地美国。

1.3 动物分组、给药与模型的建立

大鼠在 SPF 条件下自由饮水，普通饲料喂养1周后，被随机分为正常对照组、模型对照组、辽细辛组、单叶细辛组，每组10只。除正常对照组外，其余各组造模：以质量分数250 g/L乌拉坦(4 μL/g)腹腔注射麻醉，常规消毒，仰卧位固定；颈部正中切开皮肤，钝性分离暴露正中气管、左侧颈总动脉、气管；于环状软骨下方0.5cm处横向切开气管前壁，再向头端作纵向切口，使切口呈倒“⊥”字形，插“Y”型气管插管，固定后，吸净血液；右侧管经张力换能器与BioLap420E生物信号监测系统相连；分离左侧颈总动脉备用，用20号套管针穿刺置管并结扎固定，以备采血检测；待呼吸平稳后，左侧管插入软塑料内套管，固定后按 2.5 μL/g 灌注7 ℃冷生理盐水入肺内，保留30 s 后抽出，5 min 后重复灌洗1次，连续5次。按上述方法，寒饮射肺动物模型复制成功[2]。

自造模成功后第2天，正常对照组、模型对照组灌胃9 g/L NaCl溶液1 μL/g，两细辛给药组分别灌胃相应的中药水提取液1 μL/g，1 d 1次，连续28 d。

1.4 检测指标

经气管插管向支气管内注入9 g/L氯化钠注射液行支气管肺泡灌洗，每次灌入2 mL，保留30 s，反复抽洗3次，至肺泡灌洗液总量达4 mL左右，总灌注量6 mL/只，留取肺泡灌洗液，离心取上清，待测。左侧颈总动脉取动脉血8 mL待测。血清、肺泡灌洗液PC-III检测采用放免分析法、TGF-β1采用酶联免疫法，操作方法严格按说明书进行。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 大鼠一般情况对比

正常对照组大鼠毛发光泽，呼吸平稳，体质量渐增，活泼好动。模型对照组大鼠毛稀疏，气促，口、爪趾黏膜紫绀，体质量减轻，活动能力下降。两中药组症状有所好转，皮毛顺滑，咳嗽、气促减轻，饮食增多，体质量有所上升，活动能力增强。

2.2 各组大鼠肺泡灌洗液、血清TGF-β1、PC-III含量对比

与正常对照组对比，模型对照组大鼠肺泡灌洗液、血清TGF-β1、PC-III含量均升高，差别有统计学意义(P<0.05)，说明造模成功。与模型对照组对比，两细辛给药组肺泡灌洗液、血清TGF-β1、PC-III含量均下降，说明药物治疗有效。两细辛给药组TGF-β1、PC-III对比，差别无统计学意义(P>0.05)。见表1。

组别动物数TGF-β1肺泡灌洗液/(ng·L-1)血清/(ng·L-1)PC-Ⅲ肺泡灌洗液/(ng·L-1)血清/(ng·L-1)正常对照组1011.154±1.59911.554±1.32920.847±1.31475.228±2.465模型对照组1036.845±2.059**42.765±0.735**34.255±1.308**133.945±1.871**辽细辛组1020.165±0.761##25.965±0.899##23.636±0.435##106.382±1.417##单叶细辛组1021.236±0.878##△27.036±0.642##△24.034±0.415##△110.762±4.982##△

注：与正常对照组对比，**P<0.05；与模型对照组对比，##P<0.05；与辽细辛组对比，△P>0.05。

3 讨论

单叶细辛是细辛属草本植物，味辛，性温，归心、肺、肾经，主要分布于甘肃、宁夏、陕西等地。全草具有祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮的作用，民间药用历史悠久。《神农本草经》记载“ 细辛主咳逆，温肺化饮止咳”，《本草纲目》记载“辛能泄肺，故风寒咳嗽上气者宜用”[3-4]。

在众多细胞因子中，TGF-β1可调控细胞的分化、黏附、运动、凋亡以及细胞外基质的分泌，由巨噬细胞、成纤维细胞、中性粒细胞等合成与分泌，可以促进透明质酸和Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的合成与分泌，最终导致细胞外基质在肺内积聚，肺泡壁增厚，引起肺纤维化、呼吸功能障碍。TGF-β1还可上调胶原和纤维粘连蛋白的mRNA表达水平，使损伤区域成纤维细胞大量增殖，影响其他纤维化细胞因子，促进炎症的发展[5]。慢性肺疾病主要是由于肺泡上皮细胞、炎性细胞、血管内皮细胞等细胞膜受到脂质过氧化损伤，肺基质中胶原沉积过多。PC-III主要分布于呼吸系统的肺间质，是细胞外基质的主要成分之一，是细胞外基质合成和降解的重要调节因子，而细胞外基质降解和沉积失衡是慢性肺疾病主要原因，PC-III其表达的高低可代表肺纤维化的严重程度[6-7]。

本实验结果显示，单叶细辛可以通过下调TGF-β1、PC-III的表达抑制肺部炎症反应的发生和发展，减轻肺组织病理改变而起到治疗作用，单叶细辛药物疗效与辽细辛相近。

[1]李杨，黄世佐，明海霞，等.单叶细辛对“寒饮射肺”证模型大鼠呼吸和血气指标的影响[J].甘肃中医学院学报， 2010，27(1)： 17-19.

[2]明海霞，黄世佐，李杨，等.单叶细辛对寒饮射肺证模型大鼠肺通气功能相关指标的影响[J].中国中医药信息杂志， 2009,16(5)：23-25.

[3]刘效栓，宋平顺，丁永辉.甘肃细辛的植物资源调查兼论细辛的产地变迁[J].中草药，2002， 33(1): 78-79.

[4]周祯祥.细辛本草研究[J].中医药信息，2007，24(1)：35-37.

[5]肖清萍,孙坚.肺间质纤维化的发病机制研究进展[J].江西医药，2007，42(6):569.

[6]李爱敏，袁雅冬.特发性肺纤维化患者血清MDA水平与PCⅢ和LN的相关性[J].军医进修学院学报，2011，32(3)：261.

[7]李江，武芳，黄茂，等.川芎嗪对肺纤维化大鼠Ⅲ型胶原及层黏连蛋白的干预作用[J].实用儿科临床杂志，2007，22(4)：290-291.

(编辑陶珠)

1001-6910(2015)10-0063-02 ·实验研究·

R285.5

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.10.30