谢迎春(三峡大学第一临床医学院 宜昌市中心人民医院，湖北宜昌443003)



不明原因肝病患者中隐匿性HBV感染情况观察

谢迎春(三峡大学第一临床医学院 宜昌市中心人民医院，湖北宜昌443003)

摘要：目的观察不明原因肝病患者中隐匿性HBV感染情况。方法病因不明的肝病患者79例，应用PCR法检测血清HBV DNA。结果79例病因不明肝病患者中，HBV DNA阳性 15例(18.98%)；其中，抗HBc阳性者中，HBV DNA阳性12例(37.5%)；与不明原因肝炎相比，隐匿性HBV感染者年龄大、失代偿性肝硬化患者比例高，血透明质酸、ALT升高，白蛋白降低，P均<0.05。结论不明原因肝炎患者中存在一定的隐匿性HBV感染，与肝硬化密切相关。

关键词：病毒性肝病；隐匿性感染；肝炎标志物；乙型肝炎病毒

长久以来，医学界认为乙肝表面抗原(HBsAg)转阴和抗-HBs出现是HBV清除和临床体征恢复的指征。但是，近年来大量文献报道[1～3]，有些血清HBsAg呈阴性的患者血清中仍可检测出HBV DNA，这种情况临床上称为隐匿性HBV感染。本研究通过观察不明原因肝病患者中隐匿性HBV感染情况，了解其发病的原因和流行病学情况。现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料纳入标准：①血清乙肝病毒标志物(HBV-M)呈阴性，即HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc均阴性；② HBsAg阴性，但多个或单个抗体呈阳性(抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc中多个或单个阳性)。排除标准：①其他慢性病毒性肝炎；②酒精性或药物性肝病；③代谢性肝病、自身免疫系统引起的肝病。宜昌市中心人民医院2009年3月～2011年11月收治的符合标准的病因不明肝病患者79例，其中男41例、女38例，年龄(46.59±17.21)岁，病程(3.34±2.45) a；肝炎37例，肝癌9例，肝硬化33例。HBV-M检测抗-HBs、抗-Hbe、抗-HBc阳性(1组)7例，抗-HBs、抗-HBc阳性(2组)9例，抗-HBc阳性(3组)32例，抗-Hbe、抗-HBc阳性(4组)5例，抗-HBs阳性(5组)6例，乙肝五项均阴性(6组)20例。治疗前均行透明质酸、白蛋白、ALT检测。

1.2方法

1.2.1HBV DNA检测方法清晨肘部取空腹血5 mL，以12 000 r/min离心10 min，取上清液，置于-30 ℃保存核酸提取：取血清150 μL，严格按照试剂盒说明书要求操作，采用逐吸附法提取HBV DNA；最后得到50 μL核酸提取液，于-30 ℃保存，作为PCR扩增模板。引物设计：参考文献[2]，选择HBV DNA中S区，设计两对引物。外部引物：上游引物5′-AGAACGTCCCAACATGACTG-3′，下游引物5′-CAAAGCTATCTACCGACCGG-3′；内部引物：上游引物5′-AGCAGGCGTGCCGCTCTTAG-3′，下游引物5′-ACATCTTCGCATCCGACTAG-3′；产物条带为693 bp。PCR扩增方法：每次扩增反应中，阳性对照(试剂自带)选用乙肝患者血清HBV DNA为模板；阴性以ddH2O为模板；反应体系总体积50 μL，其中Taq聚合酶0.3 μL，dNTPs 3μL，buffer 5 μL；外引物中上游引物2 μL、下游引物2 μL，DNA模板2 μL，ddH2O 35.7 μL。第1轮扩增反应条件：预变性95 ℃ 5 min，变性95 ℃ 1 min，退火55 ℃ 1 min，延伸75 ℃ 1 min，终末延伸75 ℃ 5 min，循环40次；第2轮扩增的模板为2 μL上轮PCR产物，反应体系与第1轮相同，选用内部引物中一对引物。反应条件：预变性95 ℃ 5 min，变性95 ℃ 2 min，退火50 ℃ 1 min，延伸70 ℃ 1 min，终末延伸70 ℃ 3 min，循环40次。反应结束后进行凝胶电泳分析，紫外检测，与标准标志物对照，对应部位出现荧光条带则为阳性。

2结果

79例病因不明肝病患者中，HBV DNA阳性 15例(18.98%)。其中，1～6组分别为0、1、12、0、0、2例；3组与1、4、5组比较，P均<0.05；3组与6组比较，P<0.05；其余各组间比较，P均>0.05。另外，HBV DNA阳性在肝炎、肝硬化、肝癌中分别为4、8、3例，三者间两两比较，P均>0.05。79例病因不明肝病患者中，隐匿性HBV感染失代偿肝硬化5例(33.33%)，非隐匿性HBV感染者4例(6.25%)，P<0.05；二者年龄及血透明质酸水平、白蛋白、ALT比较，见表1；二者性别、输血史和直系亲属HBV感染差异均无统计学意义(P均>0.05)。

HBVDNAn年龄(岁)透明质酸(ng/mL)白蛋白(g/L)ALT(U/L)阳性1552.1±10.1*856.23±60.67*33.17±5.78*369.54±38.49*阴性6443.7±14.2307.45±58.1237.78±7.92151.48±50.15

注：与HBV DNA阴性者比较，*P<0.05。

3讨论

隐匿性HBV感染患者在血清HBV-M抗体阳性和(或)阴性的检出率，很多文献报道均有差异。有研究发现[4]，HBV-M阴性人群HBV DNA检出率为5%，在抗-Hbe阳性、抗-HBc阳性者中检出率为18%。本研究中，单抗HBc阳性检出率最高，达37.5%，与文献[5]报道一致；HBV-M全阴性检出率为10%，与文献报道[6]相当。目前，尚不明确HBV-M全阴性患者检测到HBV DNA阳性的原因是从病毒标记物消失还是刚开始感染就已发生。因此，对于各种长期不明原因的肝病患者均应行HBV DNA检测，判断是否为隐匿性HBV感染导致。

另外，我们还发现隐匿性HBV感染多发于中老年人群，且失代偿性肝硬化发生率(33.33%)显著高于非隐匿性HBV感染者(6.25%)，ALT偏高、血清白蛋白下降，透明质酸升高。但隐匿性HBV感染者无家庭聚集爆发情况，该观点也得到吴蓓颖等[7]研究的支持。

出现隐匿性HBV感染的原因可能与输血性感染、器官移植等传播HBV、急性慢性肝炎、血液透析和HBV母婴传播、肝硬化和肝癌等密切相关[8，9]。无偿献血者中存在隐匿性HBV感染，这在许多研究中已有报道。陈长荣等[10]对无偿献血者做隐匿性HBV感染筛查，结果发现隐匿性HBV感染率高达0.21%(20/9 091)；倪宏英等[11]报道，无偿献血者隐匿性HBV感染率为0.208%(19/9 159)，二者结果相当。Elgohry等[12]对埃及93例长期血液透析患者进行研究，发现隐匿性HBV感染者有25例(26.8%)，其中3例抗-HBc、抗-HBs同时阳性，1例抗-HBc、抗-HBs同时阴性，15例仅抗-HBc阳性，6例仅抗-HBs阳性，说明隐匿性HBV感染在长期血液透析患者中的发生率较高。

我国是一个肝病大国，隐匿性肝炎占很大比例,加强对此类患者的监控和管理，对控制病情发展，减少远期不良后果，甚至对预防输血后肝炎、器官移植失败、母婴垂直传播等均有重要意义[13]。因此，加大隐匿性HBV感染的流行病学、临床治疗、检测方法研究，寻找其致病原因、提前预防、有效治疗是一项艰巨任务。

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(收稿日期：2014-02-07)

中图分类号：R512.6

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2015)04-0072-02

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.04.029