陈 玲 王 娜

（1.陕西省西安市中心医院，陕西 西安 710003；2.陕西省西安市医院医院，陕西 西安 710001）

·实验报告·

健脾止泻散对脾虚泄泻小鼠PMΦ吞噬功能、血清LZM含量的影响

陈 玲1王 娜2

（1.陕西省西安市中心医院，陕西 西安 710003；2.陕西省西安市医院医院，陕西 西安 710001）

目的探讨脾虚泄泻与巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量变化的规律，揭示脾虚泄泻对免疫功能的影响；通过中药制剂（健脾止泻散）治疗脾虚泄泻小鼠，观察疗效，为其临床应用提供实验学依据。方法以幼龄ICR系小鼠为实验研究对象，用番泻叶水浸液灌胃建立脾虚型泄泻动物模型，用健脾止泻散治疗，对其进行大便性状、饮食量、体质量和腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶菌酶含量水平进行比较。结果与空白对照组相比，脾虚自然恢复组的小鼠大便稀薄，饮食量、体质量明显降低，同时其腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶菌酶含量明显降低（P＜0.01）；与脾虚自然恢复组相比，健脾止泻散明显改善了脾虚泄泻小鼠的大便性状，饮食量和体重明显增加，同时提高了其腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量水平（P＜0.01）。结论脾虚泄泻小鼠存在免疫功能的低下，通过健脾止泻散治疗不仅改善了脾虚泄泻小鼠的整体状况，而且提高了其腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量，从而进一步证明健脾止泻散是治疗脾虚泄泻的有效方剂。

泄泻 脾虚 健脾止泻散 免疫功能 实验研究

小儿泄泻是由脾胃功能失调，引起大便次数增多，性状改变为主的病证。是儿科常见病、多发病之一。发病年龄多见于2岁以内的婴幼儿，年龄越小，发病率越高。本病一年四季都可发生，夏秋季更为多见。近年来，由于病毒感染的增多，秋冬季节的发病率也呈上升趋势。据世界卫生组织（WHO）调查，亚、非、拉三洲5岁以下每年有5亿小儿患腹泻，病死率约为1%~4%，说明本病是目前严重危害儿童健康的疾病之一［1］。如此众多的患儿，如果得不到及时、有效、系统的治疗，迁延日久形成脾虚泄泻，会存在不同程度的消化吸收障碍，营养不良，生长发育迟缓和免疫功能低下，严重影响小儿的身心健康。因此本病深受广大家长和医务工作者的重视。本实验以幼龄小鼠为研究对象，用番泻叶水浸液灌胃建立脾虚型泄泻动物模型，并设立对照组，测定实验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量水平，观察其变化的规律，以探讨脾虚泄泻与免疫功能的关系；观察健脾止泻散的疗效，从而为指导临床实践及开发中药及复方制剂做出有益的探索，具有一定的学术价值和社会、经济效益。

1 材料与方法

1.1 实验动物

60只清洁级幼龄ICR系小鼠，雌雄各半，40~50 d龄，体质量（20±2）g，由陕西中医研究院动物实验中心提供（合格证号为医动字第08-24号）。

1.2 药品

番泻叶以沸水浸渍浓缩成100%水浸液 （含生药量1.0 g/mL），造模用。购自陕西中医学院金秋门诊中药房。健脾止泻散：党参10 g，白术10 g，茯苓10 g，薏苡仁10 g，干姜3 g，诃子3 g，乌梅3 g，甘草6 g。常规煎法制成浓缩液（含生药量1.0g/mL），冷藏保存150mL。购自陕西中医学院金秋门诊中药房。

1.3 试剂与实验器械

溶菌酶测试盒：由南京建成生物工程研究所提供。瑞氏-姬姆萨复合染液：由南京建成生物工程研究所提供。葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、可溶性淀粉、肉汤培养液：由陕西中医学院生化实验室提供。723可见分光光度计（上海光谱有限公司生产）、DH6-9075A型电热恒温鼓风干燥箱 （上海恒科科技有限公司生产）、TDL80-2B型台式离心机 （上海安亭科学仪器厂制造）、HH-2数显恒温水浴箱 （周华电器有限公司）、肝素抗凝管（购自南京建成生物工程研究所）、微量式移液器均由陕西中医学院生化实验室提供。

1.4 可溶性淀粉肉汤的制备

按文献［2］方法，于肉汤培养液100 mL中加入可溶性淀粉6 g，配制成6%的可溶性淀粉肉汤，混匀后煮沸灭菌备用。

1.5 阿氏液的制备

按文献［3］方法，葡萄糖6.15 g，枸橼酸钠2.4 g，氯化钠1.26 g加蒸馏水溶解至300 mL。

1.6 鸡红细胞悬液的制备

按文献［4］方法，用无菌注射器自健康雄性鸡翼下静脉采血，按1∶5的量与阿氏液混合，至于4℃冰箱保存备用。实验时取备用的鸡血用生理盐水经1000 r/min离心5 min，洗涤3次，配制成5%的鸡红细胞悬液。

1.7 造模及给药方法

60只小鼠适应性喂养1周后，随机分为5组：空白对照组（A组）、脾虚自然恢复组（B组）、健脾止泻散大剂量组（C组）、健脾止泻散中剂量组（D组）、健脾止泻散小剂量组（E组），各组12只，均雌雄各半（因防止造模过程中因脱水、意外死亡确保每组动物不少于10只，故增加部分动物）。

1.7.1 造模 造模前后每日晨定时观察大便性状，测量饮食量、体重，记录一般情况。按文献［5］方法，给B、C、D、E四组小鼠以100%番泻叶水浸液灌胃，每只0.5 mL/次，每日2次，连续20 d。据参考文献［6］制定本实验脾虚动物模型标准：（1）泄泻严重甚至脱肛；（2）食少纳呆；（3）消瘦、体重减轻；（4）神态萎蘼，四肢不收，毛色枯槁；（5）蜷缩聚堆；（6）易疲劳。以（1）、（2）为主证，（3）~（6）为兼证，具备两项主证及两项兼证即可认为脾虚造模成功。

1.7.2 给药方法 造模成功后均衡动物保证各组间数量相等，从停止造模当日开始灌胃，均每只0.5 mL/次，每日2次，共10d。A组：不予处理。B组：0.9%氯化钠注射液。C组：健脾止泻散（浓度0.64g/mL，生药量16g/kg）。D组：健脾止泻散（浓度0.32 g/mL，生药量8 g/kg）。E组：健脾止泻散（浓度0.16 g/mL，生药量4 g/kg）。

1.8 观察、检测指标及方法

1.8.1 大便性状、进食量和体质量 造模前后观察每只小鼠的大便性状，记录进食量、体质量。并将B、C、D、E四组小鼠与A组进行对照性观察。（注：为避免检测物质的周期节律性变化，上述指标的观察均在8∶00~9∶00进行）

1.8.2 腹腔巨噬细胞的收集 按文献［2，4，7］方法，略有改进，于末次给药前3 d起每日腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤0.5 mL，以刺激小鼠的腹腔产生较多的巨噬细胞。于末次给药当天下午腹腔注射5%鸡红细胞悬液1 mL，16 h后处死动物，抽取腹腔液，制片，在油镜下每片观察100个巨噬细胞，计算出小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数。

1.8.3 血液的收集和处理 末次给药当日下午禁饮食，12 h后，在抽取腹腔液前摘眼球取血，离心，按试剂盒操作说明测血清溶菌酶含量。

1.9 数据处理 应用SPSS11.5统计软件。计量资料以（±s）表示，采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组小鼠大便性状，进食量、体质量的比较 见表1。造模前1周内，所有动物均反应良好，活动活跃，大小便、饮食、毛发均正常，组间无任何差异。在造模开始后第2日起造模组小鼠的大便呈糊状，第4日起喜扎堆、倦卧，第5日起大便稀薄、肛门污、背毛散乱无光泽，第20日，与A组相比，B、C、D、E组小鼠进食量和体质量明显降低（P＜0.01），结合大便性状、活动、毛发等的改变，说明造模成功。治疗后，与B组相比，C、D、E组小鼠的大便性状逐渐好转，活动增多，毛发有光泽，饮食量和体质量明显增加（P＜0.01），说明健脾止泻散治疗本病是有效的。同时，C、D、E组的饮食量和体质量与A组相比差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01），且低于A组，说明治疗组小鼠的饮食量和体质量尚未完全恢复正常，可能与治疗疗程不足有关。而C、D、E组间的饮食量和体质量差异无统计学意义（P＞0.05），说明量效关系不明显。

表1 造模前后实验小鼠进食量、体质量对照（±s）

表1 造模前后实验小鼠进食量、体质量对照（±s）

与A组比较，*P＜0.01；与B组比较，#P＜0.01，##P＜0.01，###P＜0.01；C、D、E与A组比较，&P＜0.01，&&P＜0.05，&&&P＜0.01。

组 别 时间 进食量（g /只） 体质量（g）A组 第1日 3 . 3 1 ± 0 . 3 8 2 0 . 2 4 ± 0 . 8 8（n = 1 0） 第2 0日 4 . 8 5 ± 1 . 1 2 2 5 . 3 1 ± 0 . 9 3第3 0日 5 . 8 3 ± 0 . 5 5 2 8 . 3 0 ± 0 . 8 8 B组 第1日 3 . 3 8 ± 0 . 4 4 2 0 . 2 9 ± 0 . 8 8（n = 1 0） 第2 0日 3 . 2 6 ± 0 . 7 0* 2 0 . 4 6 ± 0 . 4 7*第3 0日 3 . 7 1 ± 0 . 7 0* 2 3 . 4 9 ± 0 . 6 8*C组 第1日 3 . 4 9 ± 0 . 3 7 2 0 . 3 5 ± 0 . 9 0（n = 1 0） 第2 0日 3 . 1 9 ± 0 . 8 1** 2 0 . 9 9 ± 0 . 8 1**第3 0日 4 . 7 8 ± 1 . 2 6#& 2 7 . 2 3 ± 0 . 4 7#&D组 第1日 3 . 4 8 ± 0 . 4 0 2 0 . 5 6 ± 0 . 8 9（n = 1 0） 第2 0日 3 . 3 3 ± 0 . 9 2*** 2 0 . 5 0 ± 0 . 5 2***第3 0日 5 . 0 9 ± 0 . 5 8##&& 2 7 . 7 2 ± 0 . 5 8##&&E组 第1日 3 . 5 1 ± 0 . 3 3 2 0 . 3 9 ± 0 . 6 0（n = 1 0） 第2 0日 3 . 2 3 ± 0 . 7 3**** 2 1 . 0 0 ± 0 . 5 5****第3 0日 4 . 6 8 ± 1 . 0 4###&&& 2 7 . 3 7 ± 0 . 4 5###&&&

2.2 各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清溶菌酶含量水平的比较 与A组相比，B组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数明显下降，血清溶菌酶含量明显降低 （P＜0.01），说明脾虚泄泻存在免疫功能的低下。与B组相比，C、D、E组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数明显提高，血清溶菌酶含量明显回升（P＜0.01），说明健脾止泻散提高了机体的免疫功能，见表2，表3。

表2 健脾止泻散对实验小鼠进食量、体质量的影响（±s）

表2 健脾止泻散对实验小鼠进食量、体质量的影响（±s）

B组与A组比较，*P＜0.01；C、D、E组与B组比较，#P＜0.01，##*P＜0.01，###*P＜0.01；C、D、E与A比较，&P＜0.01，&&P＜0.01，&&&P＞0.05；C、D、E组间比较，$P＜0.01，$$P＜0.01，$$$P＜0.01。

组别 n 吞噬率（%） 吞噬指数A组 1 0 5 5 . 3 ± 1 . 1 6 1 . 5 6 ± 0 . 0 6 B组 1 0 2 7 . 1 ± 1 . 6 6* 1 . 1 3 ± 0 . 0 7*C组 1 0 6 9 . 4 ± 1 . 5 1#&$$$$ 2 . 2 1 ± 0 . 1 7#&$$$$D组 1 0 6 3 . 1 ± 2 . 4 2##&&$$ 1 . 7 5 ± 0 . 1 1##&&$$E组 1 0 5 4 . 4 ± 2 . 9 5###&&& 1 . 4 8 ± 0 . 1 2###&&&

由表2可知，E组与A组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；C、D组与A组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。

表3 健脾止泻散对实验小鼠血清溶菌酶含量水平的影响（±s）

表3 健脾止泻散对实验小鼠血清溶菌酶含量水平的影响（±s）

B组与A组比较，*P＜0.01；C、D、E组分别与B组比较，#P＜0.01，##P＜0.01，###P＜0.01；C、D、E组分别与A组比较，&P＜0.01，&&P＞0.05，&&&P＜0.01；C、D、E组间比较，$P＜0.01，$$P＜0.01，$$$P＜0.01。

组别 n A组 1 0 B组 1 0 C组 1 0血清溶菌酶（μ g / m L）1 7 . 2 3 ± 5 . 5 6 3 . 7 1 ± 1 . 3 0*2 4 . 6 1 ± 1 . 6 4#&$$$$D组 1 0 1 4 . 5 6 ± 2 . 6 9##&$$E组 1 0 9 . 7 1 ± 2 . 6 4###&&&

由表3可知，D组与A组比较，差异无统计学意义（P＞0.01），C组、E组与A组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨 论

本实验通过番泻叶水浸液灌胃建立脾虚型泄泻动物模型，并用健脾止泻散治疗，观察小鼠大便性状、进食量、体质量、活动、毛发等的变化，检测腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶菌酶的含量水平。结果表明，中药治疗组与脾虚自然恢复组相比较，小鼠的大便性状改善、进食量、体质量增加、活动增多、毛发变得有光泽，同时腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶菌酶的含量水平明显提高。因此说明，健脾止泻散具有促进机体消化吸收和提高免疫功能的作用。

本实验提示脾虚泄泻小鼠不但有大便性状改变、饮食量、体质量下降等消化功能的障碍，而且巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量降低，说明发生脾虚泄泻时存在机体免疫功能的低下。通过健脾止泻散治疗不但明显改善了实验小鼠的整体状况，而且提高了其腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量水平，是从根本上治疗小儿脾虚泄泻的有效方剂。现代医学认为“脾”为人体免疫的器官，与免疫功能关系密切，脏腑功能失常时免疫力降低，抗病能力下降，导致腹泻发生。从而提示脾虚证的本质可能是以消化系统功能紊乱为主的全身功能失调的一种多因素病证。因此，补“脾气”是治愈该证的治本之法，治疗效果与提高机体的免疫功能有关。本实验通过采用“健脾益气”的方法，促进脾的运化功能，改善机体的各种虚损状况，使气血生化有源，机体的免疫系统可以发挥其正常的功能，从而有利于疾病趋向痊愈。这与中医“脾为之卫”、“脾旺不受邪”的认识相符合。通过健脾止泻散的使用，一方面可以调整胃肠运动，恢复脾胃的消化吸收功能，改善大便性状，这是其治疗小儿脾虚泄泻的机理之一；另一方面，随着脾胃运化功能的好转，消化吸收能力增强，可充分吸收食物中的营养物质，从而提高机体的免疫力。同时，有些中药如党参、白术、茯苓、薏苡仁本身就具有提高机体免疫力的作用。随着免疫功能的提高，小肠吸收能力增强，脾气健运，从而促使腹泻得到较快恢复，这是其治疗小儿脾虚泄泻的机理之二。故健脾止泻散可通过健脾补气增强脾的功能，进而调节机体的免疫功能。因此，运用健脾止泻散治疗脾虚泄泻是较为科学的方法。

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R285.5

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1004-745X（2015）02-0278-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.02.033

2014-08-20）