视网膜脱离后光感受器细胞死亡规律的实验研究
2014-11-13董凯柯根杰武立云朱子诚许迅孙晓东
董凯 柯根杰 武立云 朱子诚 许迅 孙晓东
视网膜脱离(retinal detachment,RD)是一种常见的眼科疾病,病理过程复杂,致盲率高,光感受器细胞的不可逆损伤是导致RD患者视力损伤的主要原因[1-2]。本课题组根据前期研究[3],提出如下假说:RD后光感受器细胞不仅有凋亡,同时存在有程序性坏死,如坏死性凋亡。但是,目前在RD中尚不清楚光感受器细胞坏死的时间分布规律,所以本研究拟通过建立RD模型,研究光感受器细胞凋亡和坏死的时间分布规律,为进一步研究程序性坏死提供较为理想的干预和检测的时间靶点。
1 材料与方法
1.1 实验动物 实验动物选用雄性健康的 Sprague-Dawley大鼠24只,体质量260~280 g,由上海交通大学附属第一人民医院提供,所有实验操作均严格遵守美国视觉眼科研究学会对动物实验的要求和上海交通大学及安徽医科大学对动物实验的规定。
1.2 实验方法
1.2.1 视网膜脱离动物模型的建立 实验大鼠由腹腔内注射 100 g·L-1水合氯醛麻醉,5 g·L-1托吡卡胺和5 g·L-1肾上腺素眼液散瞳;术前可乐必妥眼液冲洗结膜囊(中国苏州参天制药有限公司),置角膜接触镜,30-G针穿刺视网膜下,沿视网膜下注入10 g·L-1透明质酸钠50 μL(中国山东博士伦公司),可见局部RD约占1/2范围,脱离范围于结膜面用10-0缝线做标记,以备取材时定位用[4-6]。每只实验大鼠右眼建立 RD模型,左眼作为对照组。
1.2.2 电镜检测 按照文献报道的方法进行电镜检测[4,7]。(1)取材:腹腔内注射 100 g·L-1水合氯醛麻醉,摘除眼球,沿缝线标记范围取出视网膜组织。(2)固定:体积分数25%戊二醛固定12 h,制成1 mm×3 mm条块,重新固定液固定。……
