高小燕 何守志

核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是1986年首先从B细胞核中提取到，近年在肿瘤中研究较热的一个核转录因子，参与多种炎症细胞因子、趋化因子及免疫基因表达的转录和调节。一般情况下，NF-κB 与其抑制蛋白 IκB(inhibitory кB，IκB)结合呈非活性状态，但受刺激后可以和IκB解离，进入细胞核内，参与细胞因子、黏附分子、生长因子和急性蛋白等因子的转录调控，在疾病的调节，尤其是炎症性疾病的启动中起重要作用［1］。近年来研究的焦点在于NF-κB在新生血管形成中的作用［2-3］。本实验仅就NF-κB在脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)中的表达作一研究。

1 材料与方法

1.1 仪器设备与主要药品试剂 氪激光机(美国Coherent公司，型号为Novua 2000);FFA摄像机(德国Heideberg公司);Image-Pro Plus 5.1图像分析系统(美国Media Cybernetics公司)。小鼠抗大鼠NF-κB单克隆抗体0.1 mL、AEC显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司);兔抗大鼠单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)多克隆抗体、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)原位杂交检测试剂盒、即用型SABC 试剂盒、0.01 mol·L－1枸橼酸盐缓冲液、SP-9002免疫组织化学染色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 BN大鼠CNV模型的建立 48只健康雄性棕色BN大鼠由中国医学科学院实验动物中心提供，系清洁级动物，体质量200～220 g，随机选取一眼作为实验眼。0.5 g·L－1复方托品酰胺滴眼液滴双眼散瞳，左下腹腔内注射100 g·L－1水合氯醛溶液(3.0 mL·kg－1)麻醉，检查双眼前节和眼底均正常。依照赵世红等［4］的方法建立CNV动物模型，实验眼前放置－53 D的接触镜，氪激光(647 nm)距视盘等距离围绕视盘视网膜光凝20点。激光参数:功率360 mW，光斑直径 100 μm，曝光时间 0.05 s。

1.2.2 FFA检查 分别于视网膜光凝后 1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周，各选取 6只大鼠进行全身麻醉、散瞳，腹腔内注射100 g·L－1荧光素钠0.3 mL，行FFA检查。……