孙 强， 郭 澍， 唐明睿， 王玉新， 王 迪

实验研究

外源性CSMD1对黑色素瘤A375细胞活性的影响

孙 强， 郭 澍， 唐明睿， 王玉新， 王 迪

目的研究经pCDNA-3.0-CSMD1转染的A375细胞的活性，探讨外源性CSMD1的表达对黑色素瘤细胞活性的影响。方法培养人黑色素瘤A375细胞株，利用前期实验获得的CSMD1基因，构建质粒、转染细胞。A375细胞分为：A组，未转染的A375细胞；B组，经pCDNA-3.0转染的A375细胞；C组，经pCDNA-3.0-CSMD1转染的A375细胞。应用MTT法、细胞周期分析法、细胞凋亡相关检测(DAPI染色、Annexin V-FITC/PI双染、Transwell细胞迁移实验)等方法，检测A375细胞的活性，并进行统计学分析。结果C组细胞的增殖率明显低于其他两组细胞(P<0.05)；C组细胞G1期的比例高于其他两组细胞(P<0.05)；仅在C组细胞中发现凋亡细胞核固缩，并在48 h内出现核碎裂；C组细胞凋亡率为32.7%，明显高于A组(6.6%)和B组(8.4%)细胞(P<0.05)；与A组和B组细胞相比，C组细胞极少迁移至聚碳酸酯膜下层(P<0.05)。结论外源性CSMD1可以抑制黑色素瘤A375细胞的活性，这有可能为黑色素瘤的治疗提供一种新的途径。

CSMD1； 黑色素瘤； A375细胞

CSMD1(Cub and Sushi multiple domain 1 gene)被认为是许多癌组织和细胞的抑制基因[1-2]。有学者报道，前列腺癌、膀胱癌和头颈部癌症患者不良的生存率与CSMD1的缺失有关[3]。然而，CSMD1在黑色素瘤中的作用还未被检验过。前期实验中,我们已首次证实，与正常皮肤细胞相比，黑色素瘤细胞中的CSMD1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低[4]。本实验将研究经pCDNA-3.0-CSMD1转染的A375细胞的活性，探讨外源性CSMD1的表达对黑色素瘤细胞活性的影响，揭示CSMD1在黑色素瘤中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 荧光显微镜(日本OLYMPUS公司)；流式细胞仪、CellQuest软件(美国BD公司)；微孔盘读取仪(美国BIO-RAD公司)；博伊登室(美国CELLBIOLABS公司)；CSMD1(前期实验获得)；人黑色素瘤A375细胞株(美国菌种收集中心MD)；DMEM培养基(美国GBICO公司)；胎牛血清(杭州四季青公司)；TUNEL试剂盒、碘化丙碇、DAPI、凋亡检测试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；Lipofectamine 2000 (美国INVITROGEN公司)；RNaseA、多聚甲醛(美国SIGMA公司)；结晶紫(上海碧云天公司)染色。

1.2 A375细胞培养 将A375细胞接种于DMEM培养基，其中含胎儿牛血清和抗生素(100 U/ml 青霉素和100 μg/ml链霉素)，置于37 ℃，5%CO2的培养箱进行培养。……