肖幼华 李 荣 蔡联明 谢旭平 卢致洋 陈汉民 王冬梅 雷先华

结直肠上皮内瘤变是结直肠癌的癌前病变，是结直肠癌发生、发展中的一个病理阶段，是一个新的病理诊断名词，各级医院均已普遍使用这一诊断名词，其病变限于黏膜上皮或只侵犯固有膜而没有通过黏膜肌层到黏膜下层，无转移的危险。治疗方法主要是局部手术治疗。有文献报道，术前50%～90%的结直肠上皮内瘤变，术后被证实为结直肠癌，而结直肠癌，则需要采用根治性手术。本研究通过检测结直肠上皮内瘤，腺瘤及腺癌LGR5蛋白表达水平可将上皮内瘤变与腺癌区别开来，从而选择正确的外科治疗方法。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集赣州市肿瘤医院2011年-2012年住院及门诊病例，其中结直肠上皮内瘤变60例(腺瘤合并高级别上皮内瘤变32例，腺瘤合并低级别上皮内瘤变28例)其中有3例合并腺癌，男性46例，女性24例，年龄29～79岁，随机选取腺瘤10例，男性6例，女性4例，年龄37～69岁，均取自电切或手术切除标本。高分化腺癌20例，男性11例，女性9例，年龄30～70岁，均取自同期手术切除标本。各组临床病理资料经统计学检验无差异。

1.2 主要试剂

兔肠上皮干细胞蛋白单克隆抗体Anti- LGR5及SP-0023免疫试剂盒，均购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.3 方法

厚4 μm 的石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度酒精再水化。置CBS(pH6.0)高压热修复20 min，自然冷却，PBS冲洗3 次，每次3 min。加LGR5 一抗，37 ℃温箱孵育1 h。PBS 冲洗3 次，滴加二抗，37 ℃水浴箱孵育20 min，PBS 冲洗3 次。DAB 显色，苏木精复染，封片，在显微镜下观察摄片。用PBS 代替一抗作为阴性对照，用经反复验证的已知阳性切片作为阳性对照。……