程甜甜 杨贤子 骆志国

MCM2属于微小染色体维持蛋白家族(minichromosome maintenance proteins，MCMs)的成员之一。MCM2蛋白与其他家族成员形成复制前复合物可作为DNA复制的“通行证”，在所有真核细胞的DNA复制中起到重要作用[1]。我们前期的研究发现MCM2作为细胞增殖特异性标志优于常见的细胞增殖指标Ki-67，能够更客观和全面的反映肿瘤细胞的增殖状态[2]。本研究通过检测乳腺癌组织中MCM2 mRNA和蛋白水平的表达变化，进一步探讨其在乳腺癌发生发展中的临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

所有标本随机取自2012年03月1日-2013年05月1日湖北省十堰市太和医院乳腺外科住院患者的手术切除组织。全组病例均经病理检查确诊，其中乳腺恶性肿瘤54例，乳腺良性疾病12例，以乳腺良性疾病手术切除的正常乳腺组织(10例)作为对照组。54例乳腺恶性肿瘤包括35例浸润性导管癌、6例乳腺导管内癌、2例乳腺小叶原位癌、3例髓样癌、5例单纯癌、其他3例。其中Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例。12例乳腺良性疾病包括乳腺纤维腺瘤、乳腺腺病、乳腺囊性小叶增生，患者术前均未行放疗、化疗、激素和中草药物等治疗。手术标本于-80℃冻存。

1.2 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同乳腺癌组织MCM2mRNA的表达

所有PCR引物均用Primer Premier 5.0软件设计，引物序列由上海生工生物工程公司合成。MCM2引物序列上游：5’-CACGCTTTGACATCCTGTG-3’；下游：5’-TGTTGATCTGACGAGCCTTA-3’，PCR产物大小为657 bp。GAPDH引物序列上游：5’-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3’；引物下游：5’-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3’，PCR产物大小为113 bp。分别称取0.1 g的正常乳腺组织、乳腺良性疾病组织和乳腺癌组织，用匀浆器将组织碾磨碎后按照Trizol试剂(MRCGENE公司)说明书提取组织总RNA，紫外分光光度法检测RNA纯度和浓度。……