阎 良 吴雪卿 黄建平 庞惠芳

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来乳腺癌的发病率有明显的增高。化学药物治疗作为乳腺癌术前或术后辅助治疗得到了广泛的应用，肿瘤体积大的乳腺癌术前短期化疗可使肿瘤体积缩小，有利于手术切除，但对术后长期的化疗以及无法手术患者姑息性化疗的意义有不同的意见。近年来的研究发现化疗药物诱发的肿瘤细胞多药耐药(MDR)和侵袭转移之间可能存在某种关联，乳腺癌细胞在MDR药物作用下不但P-gp和EMMPRIN(CD147)表达增强，还可能出现上皮-间质转化(EMT)，这种转化有利于肿瘤细胞逃避化疗药物的攻击，并促进肿瘤细胞侵袭转移[1]。但EMT的发生与mdr基因活化的关系尚不清楚。本课题通过比较不耐药乳腺癌细胞株(MCF-7)、相应的用化学药物诱导的乳腺癌耐药细胞株(MCF-7/Adr)和多耐药基因1(multidrug resistance gene1，mdr1)导入建立的乳腺癌耐药细胞株(MCF-7/MDR1)中P-gp、CD147和E-cadherin(E-cd)的表达，以探讨MDR基因与CD147表达以及肿瘤细胞EMT的关系。

1 材料与方法

1.1 细胞株

不耐药乳腺癌细胞株(MCF-7)和相应的用化学药物诱导的乳腺癌耐药细胞株(MCF-7/Adr)购自中国科学院上海细胞研究所，mdr1导入建立的乳腺癌耐药细胞株(MCF-7/MDR1)由复旦大学上海医学院病理学系惠赠。细胞用RPMI 1640 (gibco BRL，karlsruhe，germany)培养液培养(Thermo培养箱和超净工作台)，培养液中含有10%小牛血清、100 U/mL盘尼西林及100 μg/mL链霉素，37℃、5%CO2的温箱中培养。每隔48 h换培养液。用0.25%的胰蛋白酶消化，收集并传代。实验选用对数生长期的细胞。

1.2 Western blot方法

收集细胞经预冷的PBS清洗，置细胞裂解液(50 mM pH 8.0 Tris-HCl，150 mM NaCl，1%NP-40，0.1%SDS，0.5% NaN3，2 mM EDTA，25×蛋白酶抑制剂)，冰浴30 min，4℃离心(12，000 r/min，10 min)收集上清，按照BCA Protein Assay Kit定量。……