孙 淼 于成功

南京医科大学鼓楼临床医学院消化科1(210008) 南京医科大学附属鼓楼医院消化科2

大量实验研究表明Th17细胞是连接固有免疫与获得性免疫的桥梁，除清除入侵的病原微生物外，尚与自身免疫性疾病的发生、发展密切相关[1]。Th17细胞分泌的细胞因子白细胞介素-17A(IL-17A)、IL-6等可促进T细胞活化，刺激上皮细胞、成纤维细胞分泌多种细胞因子如趋化因子受体CCR6、IL-8以及细胞黏附分子-1(CAM-1)等，对中性粒细胞起动员、活化作用，进而诱导或加重炎症反应。随着对T细胞研究的不断深入，T细胞受体(TCR)及其共受体/配体系统与T细胞活化和功能的关系在作为自身免疫性疾病之一的炎症性肠病(IBD)中的意义引起关注。淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte function-associated antigen-1, LFA-1)是淋巴细胞活化的重要共刺激受体，参与T细胞的活化和功能调节，能增强抗原呈递细胞活性，维持抗炎与促炎因子平衡。LFA-1在调节性T细胞(Treg细胞)的稳态和功能发挥中的作用已得到认可[2]，与Th17细胞分化和功能的关系则尚无定论。本实验旨在观察不同诱导条件下LFA-1基因缺失(LFA-1-/-)对小鼠脾脏初始T细胞(Naïve T细胞)体外向Th17细胞分化的影响，探讨LFA-1参与IBD的潜在机制。

材料与方法

一、实验动物和主要试剂、仪器

LFA-1-/-小鼠15只，为购自Jackson Laboratory的纯合子LFA-1-/-小鼠(Strain Name: B6.129S7-Itgaltm1Bll/J, Stock Number: 005257)在南京鼓楼医院动物实验中心SPF条件下繁殖的子代小鼠，均经基因型鉴定筛选。具有相同遗传背景的LFA-1+/+[野生型(WT)]C57BL/6J小鼠15只作为对照组。两组小鼠均为6～10周龄，雌鼠7只，雄鼠8只。

RPMI 1640培养基、FBS(Gibco®, Thermo Fisher Scientific Inc.)，ReadyMixTMTaq PCR反应混合物(Sigma-Aldrich Co. LLC.)，淋巴细胞分离液(深圳市达科为生……