凌跃新 童赛雄

(复旦大学附属中山医院普外科，上海 200032)

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)是一种多肽生长因子，具有促进肝细胞、上皮细胞、内皮细胞、造血细胞等多种细胞生长、迁移和形态改变的作用。HGF主要在间质细胞中表达，但在小肠、大脑、甲状腺、胸腺和胎盘中也有表达[1]。近年发现，多种肿瘤组织中均可检测到HGF的过度表达，说明HGF可能在肿瘤进展中有重要作用。本研究旨在探讨HGF对人胃癌细胞株AGS增殖的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 人胃癌细胞株AGS购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，CCK-8试剂盒购自日本同仁化工公司，人HGF试剂盒购自美国PeproTech公司，胎牛血清购自美国Corning公司，RPMI-1640培养液、胰蛋白酶均购自美国Gibco公司，BioRAD酶标仪购自美国Thermo公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 采用RPMI-1640培养液(含10%胎牛血清， 100 U/mL青霉素， 100 μg/mL链霉素，0.056%NaHCO3，pH值7.4)，在37℃、CO2体积分数为5%的培养箱内培养AGS细胞，用0.25%胰酶消化传代。

1.2.2 CCK-8法检测细胞增殖 收集对数生长期的AGS细胞，用血球计数板计数后将细胞加入96孔板，5000个/孔，每组设3个复孔，分别用浓度为0、25、50、75和100 ng/mL的HGF处理，终体积200 μL。在37℃、5%CO2条件下培养24 h、48 h、72 h后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，培养箱内继续孵育2 h后，每孔加入10 μL 0.1 mol/L的HCl溶液终止反应，用酶标仪检测细胞在450 nm处的光密度D值。

2 结 果

采用终浓度分别为25、50、75和100 ng/mL的HGF处理AGS细胞，并在不同的时间点进行增殖试验。CCK-8法检测结果显示，不同浓度的HGF对AGS细胞均有促增殖作用，且随HGF浓度增加或作用时间的延长，细胞增殖活力呈上升趋势,在72 h最为明显。各浓度组HGF与阴性对照组之间差异均有统计学意义(t=3.89、5.28、9.73和11.00，P<0.01)。不同实验组在同一时间段进行比较，在细胞培养72 h时，各HGF浓度下的细胞增殖活力均显著高于24 h组(P<0.01)；在细胞培养48 h时，HGF浓度为25、50、75 ng/mL的组别的细胞增殖活力均极显著高于24 h组(P<0.01)，仅HGF为 100 ng/mL的组别细胞增殖活力显著高于24 h组(P<0.05)。这表明在一定浓度和时间范围内，HGF对人胃癌细胞株AGS增殖的影响存在浓度依赖关系和时间依赖关系。见图1。