王 莉 张敏龙 金发光

淹溺是导致意外死亡的一个重要原因，特别在15岁以下青少年意外死亡中占有很大比例[1]。急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是淹溺对机体造成的最主要的伤害之一，其中海水较淡水淹溺肺损伤更为严重，也更容易发展成为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)。海水淹溺肺损伤中同时存在缺氧和高渗因素，而这两个因素常诱导自噬的产生[2-4]。

自噬(autophagy) 被称为Ⅱ型程序性细胞死亡，这种形式的细胞死亡表现为细胞浆中出现大量包裹着细胞浆和细胞器的空泡结构和溶酶体对空泡内成分的降解[5]。自噬在细胞的生长、发育和疾病发生中起着重要的作用。Beclin 1 是自噬的调控基因，是自噬的关键分子之一[6]，也可对细胞的自噬活性进行动态监测和判断。3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine, 3-MA)是磷脂酰肌醇3激酶的抑制剂，可特异性阻断自噬中自噬体的形成，被广泛用作自噬的抑制剂。

凋亡(apoptosis)是Ⅰ型程序性细胞死亡，参与许多重要的生理和病理过程，与自噬共同维持内环境稳定。近年来，内皮细胞和上皮细胞凋亡在ALI发病过程中的作用日益受到重视[7-8]。本实验拟通过检测自噬与凋亡指标来判断海水淹溺型肺损伤中自噬与凋亡的关系。

材料和方法

一、 实验试剂

地塞米松和3-MA 购自 sigma 公司。地塞米松用5‰羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethyl cellulose)溶液制成混悬液腹腔注射，3-MA溶于PBS制成悬液腹腔注射。配方海水按照中国国家海洋局第三海洋研究所海洋生化研究室提供的我国东南沿海海水的主要成分配制：NaCl 26.518 g/L，MgSO43.305 g/L，MgCl22.447 g/L，CaCl21.141 g/L，NaHCO30.202 g/L，KCl 0.725 g/L，NaBr 0.083 g/L；pH 8.2，相对密度1.05，渗透压1300 mmol/L。……