周中新， 程 轶， 代传忠， 武维恒

(徐州医学院 1附属医院胸心外科， 2心血管研究所，江苏 徐州 221002；3徐州医学院第二附属医院心内科，江苏 徐州 221006)

脂肪干细胞(adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs)是具有自我更新能力，且在适宜微环境下具有多向分化潜能的原始细胞，在心肌梗死后可直接或间接对损伤的心肌组织进行细胞补充或组织修复。但是在心肌梗死灶缺血缺氧环境下，脂肪干细胞的存活率较低,影响其对心肌组织的修复作用。血红素氧合酶 1(heme oxygenase 1，HO-1)具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗肿瘤性增殖效应，能产生对伤害性刺激的适应和保护性反应。本实验通过钴原卟啉(cobalt protoporphyrin，Copp)诱导ADSCs表达内源性HO-1，探讨内源性HO-1在低氧无血清条件下对ADSCs的保护作用及可能的分子机制。

材 料 和 方 法

1 动物

SPF级雄性SD大鼠，3周龄，体质量180～200 g，徐州医学院动物实验中心提供。

2 主要试剂

HO-1抑制剂锌原卟啉(Zinc protoporphyrin，Znpp，Strem)；HO-1诱导剂Copp(Frontier)；Ⅰ型胶原酶(Gibco)；NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白 (apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC) 兔多克隆抗体(Santa Cruz)； cleaved caspase-1兔多克隆抗体(Cell signaling)；anti-HO-1兔多克隆抗体(Abcam)；β-actin蛋白兔多克隆Ⅰ抗(碧云天)；IRDye 680标记的山羊抗兔Ⅱ抗、IRDye 800CW标记的山羊抗小鼠Ⅱ抗(Invitrogen)；细胞内活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 荧光探针 (DCFH-DA) 购于Sigma 公司；IL-1β ELISA 检测试剂盒购自上海研卉生物科技有限公司；其余所有试剂均为化学分析纯。

3 方法

3.1ADSCs的分离、培养 、鉴定 参照本课题组已发表文章[1]。

3.2Copp诱导HO-1表达的浓度曲线 将ADSCs调整密度为1×105cells/L，接种在培养瓶中，待细胞长至培养皿底面80%时，随机分为5组，分别加入含浓度为0、5、10、15、20 μmol/L Copp的完全培养基，常规培养24 h，提取总蛋白。Western blotting法检测各组HO-1蛋白水平。

3.3低氧无血清条件下ADSCs的实验分组 正常对照(control) 组：ADSCs在含完全培养基中常氧(37 ℃、21% O2、5%CO2)条件下培养；……