郑媛媛， 杨文欣， 周 晗， 胡巢凤

(暨南大学医学院病理生理学系，国家中医药管理局病理生理实验室，广东 广州 510632)

细胞凋亡是一系列信号分子精密调控的程序性死亡过程，由特定基因控制的细胞自主、有序的死亡。研究证实，氧化应激通过影响相关酶类的功能，破坏细胞膜完整性，干扰细胞的稳态，从而引起细胞的凋亡，甚至坏死。H2O2作为一种氧化剂，干扰细胞信号转导，诱导细胞凋亡[1]。

近年研究发现NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)为胞浆内的模式识别受体，目前在人类已发现20多个NLRs家族成员，主要含有3个结构域，分别为一个C末端富含亮氨酸的重复序列、位于中央的核苷酸结合位点和N末端的效应结构域。而NOD8 (也称为PYNOD) 与之不同的是C末端缺乏作为配体识别区域的富含亮氨酸的重复序列，N末端为PYD结构域以及位于中央的核苷酸结合位点[2-5]。Imamura等[6]研究发现NOD8可抑制凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC)介导的NF-κB的活化和细胞凋亡，但其抗凋亡机制尚不清楚。Caspase-3作为凋亡效应蛋白在凋亡信号转导通路中具有重要作用。为进一步探讨NOD8在细胞凋亡中的作用, 本研究主要观察NOD8对H2O2诱导人肝细胞L02凋亡的影响及可能机制。

材 料 和 方 法

1 细胞、质粒与主要试剂

人肝细胞L02由中山大学惠赠；pEGFP-C2为本室保存；pEGFP-NOD8真核表达质粒由本课题组构建。

DMEM细胞培养基、PBS、含0.25% EDTA的胰酶为Gibco产品；胎牛血清购自BI；细胞转染所用的阳离子聚合物JetPRIME为Polyplus产品； Annexin V-PE/7-AAD和caspase-3活性检测试剂盒购自Biovision；BCA蛋白定量试剂盒为上海申能博彩生物公司产品；NOD8多克隆抗体购自Santa Cruz；……