孙 湛， 巩雪俐， 冉新建， 马 琪， 龙 梅△

(新疆医科大学基础医学院 1机能中心实验室， 2病理生理学教研室，新疆 乌鲁木齐 830054)

脑血管疾病(cerebrovascular disease, CVD)是指由于各种脑血管病变所引起的脑部病变，发病率和致残率很高，给患者和家庭带来痛苦和沉重的负担，其治疗关键是改善缺血区的血供，挽救濒死的神经元。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)能够促进半暗带血管新生,有效改善半暗带血供，从而挽救濒死神经元，故已成为治疗缺血性脑损伤的研究热点。慢病毒载体尤其适用于干细胞，具有目的基因可整合到染色体上，稳定表达时间较长，不易引发宿主免疫反应等诸多优点。

富半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61，Cyr61/CCN1)是即刻早期基因编码的富半胱氨酸蛋白，是近年发现的一种分泌型基质信号蛋白[1]，能上调多种生长因子的表达，如VEGF及转化生长因子等；能促进内皮细胞黏附、增殖和迁移，调节血管生成[2]。本研究通过设计并构建出携带有含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)及大鼠CCN1目的基因的慢病毒表达载体，观察外源性CCN1能否促进BMSCs的生长和迁移，为BMSCs移植治疗缺血性脑损伤提供理论基础。

材 料 和 方 法

1 动物和材料

6～8周龄雄性Wistar大鼠1只，体质量120 g，由新疆医科大学实验动物中心提供。

STBL3感受态细胞、基因过表达慢病毒载体、慢病毒转染试剂和293T细胞为辉骏生物公司产品；高纯度质粒提取试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒、总RNA提取试剂盒和Quant一步法RT-PCR试剂盒为北京天根生化科技有限公司产品；限制性核酸内切酶为Ferentas产品；PrimeScript反转录酶、PCR扩增试剂盒和DL2000 DNA marker为大连TaKaRa产品；……