刘旭 郭晓钟 李宏宇 陈江 任丽楠 吴春燕 许文达

KAI1基因对胰腺癌转移的抑制作用已得到了证实，本课题组前期研究也发现了该基因的高表达对动物模型的淋巴结转移有抑制作用，但具体作用方式及机制尚不清楚。淋巴管新生是机体适应局部及全身环境变化的代偿或主动诱导过程，可发生在包括胚胎发育、炎症转归、伤口愈合和实体肿瘤等多种正常生理或病理过程中。研究显示，淋巴管新生是肿瘤淋巴转移的重要过程[1-3]。本研究应用胰腺癌裸鼠皮下荷瘤模型，采用KAI1腺病毒瘤内注射方式，观察淋巴结转移情况，淋巴管新生的变化，探讨KAI1基因的作用机制。

材料和方法

一、胰腺癌裸鼠模型的建立

人胰腺癌高转移细胞系MiaPaCa-2引自瑞士伯尔尼大学，本实验室保存。成功培养、传代。取对数生长期细胞，制备细胞密度为1.0×107/ml的细胞悬液。4～6周龄雄性BLAB/c裸鼠购自中国医科大学实验动物中心，在本实验室动物饲养房SPF级层流柜内分笼适应性饲养l周。然后将0.2 ml细胞悬液接种于裸鼠左侧大腿外侧皮下，定期观察裸鼠精神、饮食及体重变化情况。

二、表达KAI1基因的腺病毒瘤内注射

表达KAI1基因的腺病毒载体Ad-KAI1由本实验室先期构建[4]。将成瘤的裸鼠按数字表法随机分为生理盐水组、腺病毒(Ad)组、Ad-KAI1组，每组10只，分别瘤内注射生理盐水、Ad和Ad-KAl1，每周1次，每次100 μl，共注射3次[5]。密切观察裸鼠皮下肿瘤生长情况，每3 d用游标卡尺测量并记录肿瘤的最大径(A)、最小径(B)，并计算瘤体积(V)。V=A×B2×0.4。接种50 d后行颈椎脱臼处死裸鼠，解剖观察淋巴结转移情况，取出瘤体及淋巴结。……