贺志龙 夏伟 冯璜 许春芳

二甲双胍是一种传统的口服降糖药，一直用于2型糖尿病的治疗。然而，2005年Evans等[1]通过流行病学研究首次报道了二甲双胍能够明显地降低2型糖尿病患者的肿瘤发病率。后有多项实验研究证实了二甲双胍的抗肿瘤作用，包括胃癌、肺癌、乳腺癌等[2-4]。目前有临床研究证实，二甲双胍能显著降低糖尿病患者患胰腺癌的风险[5-6]。本研究应用二甲双胍干预人胰腺癌细胞株CFPAC-1，观察干预后细胞增殖及凋亡的变化，探讨二甲双胍抗胰腺癌的相关机制。

材料与方法

一、CCK-8法检测细胞增殖抑制率

人胰腺癌细胞株CFPAC-1由苏州大学附属第一医院血研所惠赠，常规培养、传代。取对数生长期细胞，并调整细胞密度为2.5×104/ml。96孔板的每孔中加入100 μl细胞悬液，培养24 h。弃培养液，分别加入含1、2.5、5、10、20、40、60 mmol/L二甲双胍(Sigma公司)的培养液继续培养24、48、72 h，每孔加入CCK-8溶液(日本同仁公司)10 μl，37℃孵育4 h。以未处理的细胞作为对照组，以培养液作为空白对照。每组设6个复孔。实验结束后上酶联免疫检测仪检测。以空白对照孔调零，测各孔450 nm波长处的吸光度值(A450值)。细胞增殖抑制率(inhibitory rate，IR)=(对照组A450值-处理组A450值)/对照组A450值×100%。实验重复3次，取均值。

二、流式细胞仪分析细胞周期

细胞贴壁生长达80%融合时弃培养液，加入含10、20、40 mmol/L二甲双胍培养液继续培养48 h，以未处理细胞作为对照组。用含EDTA的胰酶消化后收集各组细胞，PBS洗涤、离心3次，加入 70%乙醇，置4℃过夜。PBS洗涤2次后，加入碘化丙啶(PI)染色液(碧云天公司)，置37℃避光温浴30 min，上BIOLISA流式细胞仪分析细胞周期。实验重复3次，取均值。……