马丽媛，李晓东c，庄建鹏，尚尔坤，任红晶，李明浩，刘璐，毕伟伟

(东北农业大学 a.乳品科学教育部重点实验室；b.食品学院，c.食品安全与营养协同创新中心；哈尔滨 150030)

0 引 言

干酪副产物乳清营养价值独特，其主要成分乳清蛋白已被证实含有很多潜在的生物活性肽段，这些生物活性肽在原乳清蛋白序列中并无活性，一般通过胃肠道时释放出来的很少，但在体外可通过酶解及分离纯化技术将其释放出来，包括具有抗高血压、降胆固醇、抑菌、抗氧化等功能的活性肽[1,2]。Nagaoka,S通过小鼠生物实验证明，相比大豆蛋白和酪蛋白，牛乳清蛋白源生物活性肽具有更强的降低血液胆固醇的活性[3]。

凝胶过滤色谱是很好的分离纯化肽的方法，它是利用具有网状结构的凝胶分子筛，将不同分子大小的物质分离开来，是一种液体柱层析技术[4,5]。凝胶过滤色谱不仅能将肽分离纯化，还可以分析肽的相对分子质量，其分离分析简单快速而被广泛应用。

1 实 验

1.1 材料

乳清蛋白产品；蛋白质标准品(胰蛋白酶、溶菌酶、糜蛋白酶、牛胰岛素、维生素B12)；凝胶葡聚糖Sephadex G-50。

1.2 设备

WIGGENS数字式搅拌器，SMB-20型超滤设备，TDL-500B冷冻离心机，LGJ-1型冷冻干燥机，KQ-500B型超声波清洗器，玻璃层析柱1.5 cm×70 cm，ÄKTATMprime蛋白质纯化系统。

1.3 方法

1.3.1 乳清蛋白水解肽的制备

取一定量的乳清蛋白配制成一定浓度的水溶液，置于恒温水浴锅中90℃高温灭酶活10 min后，冷却至酶解温度，用浓度为1.0 mol/L的氢氧化钠溶液调节酶解液pH值至适宜条件，加入一定量的胰蛋白酶，将数字……