赵从波，章淑艳，罗同阳，李宾

(河北省微生物研究所，河北 保定 071051)

0 引 言

乳糖酶(Lactase)学名β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactoside galactohydrase),能够水解β-D-半乳糖苷和α-L-阿拉伯糖苷，而催化乳糖的实用意义较大，故被研究得最多［1］。牛乳和乳清中含有大量乳糖，它是乳制品中的主要碳水化合物，乳糖酶的存在是乳糖在人体内进行正常代谢的一个必要条件，如果数量缺少或活性不够，就会导致消化障碍［2］。近年来，对米曲霉、黑曲霉、脆壁酵母、乳酸酵母等菌株乳糖酶的研究报道较多，而对青霉乳糖酶的研究相对较少。本文利用一株青霉菌发酵生产乳糖酶，为提高乳糖酶的酶活，采用PB设计和响应面法对其发酵条件进行研究，确定了最佳产酶条件，以期为乳糖酶的生产提供理论基础。

1 实 验

1.1 材料

菌株：青霉 Aspergillus oryzae。

主要试剂：邻硝基苯酚(ONP)，邻硝基苯酚-β-D-半乳糖苷 (ONPG),pH值为5.5浓度为0.02 mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液。

培养基：斜面培养基(PDA培养基)。基础发酵培养基：葡萄糖20 g，乳糖5 g，蛋白胨6 g，玉米浆3 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，K2HPO4·3H2O 0.5 g，KH2PO40.5 g，Tween-80 1.5 mL，水1 000 mL。

1.2 方法

1.2.1 单孢子悬液的制备

取30℃条件下培养4 d的斜面菌种,加10 mL的无菌生理盐水,将孢子振荡打散,用带脱脂棉的漏斗进行过滤,然后用无菌生理盐水将孢子悬液稀释。血球计数板测定孢子浓度。

1.2.2 培养方法

将菌种转接斜面活化,待孢子成熟后制备孢子悬液,接种发酵培养基进行摇瓶发酵,接种量104mL-1。发酵条件:30℃,200 r/min,装液量100 L/500 L。

1.2.3 绘制标准曲线

ONP标准液的制备：称取139.0 mg的邻硝基苯酚，用10 mL体积分数为95%的乙醇溶解后，转移至1 000 mL的容量瓶中，用水定容并摇匀。

分别移……